尿激酶对实验性重症急性胰腺炎并发肾损害时炎性介质影响.doc

尿激酶对实验性重症急性胰腺炎并发肾损害时炎性介质影响急性胰腺炎（AP）是较常见的急腹症，预后差。存在胰腺坏死的重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）的死亡率高达14%～35%以上[1，2]。本研究以Wistar大鼠SAP模型为基础，通过观察血栓素A2(TXA2)、前列环素I2（PGI2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的动态改变以及肾脏组织病理改变，探讨尿激酶对SAP肾损害时炎性介质的影响。 1 资料与方法 1.1 一般资料 1.1.1 实验动物与模型制备：雄性Wistar大鼠192只（中国医科大学附属二院动物实验中心提供），体重220～280 g，随机分为3组，对照组（C），胰腺炎组(P)，治疗组(T)；各组又按模型制备后2、6、12、24小时分为4组，每组16只，用于抽取血样及组织学观察。动物实验前12小时禁食不禁水，10%水合氯醛腹腔注射3 ml/kg，左颈部切口，分离颈外静脉置入静脉营养管，于颈背部引出，并固定接补液泵，2 ml/h给予平衡液，缝合切口。再于上腹部正中切口进腹，4号头皮静脉针于十二指肠乳头对侧缘穿刺，拉细的硬膜外导管逆行穿入胰胆管末端，动脉夹分别于十二指肠端和肝门部夹闭胰胆管，逆行注入5%牛磺胆酸钠（美国Sigma公司），注射时间为1分钟，保持5分钟，去除动脉夹，拔除穿刺管，胰腺出现充血、水肿、局灶性坏死后，进行后续实验。对照组开腹后仅翻动十二指肠后关腹。治疗组在模型制成后30分钟给予尿激酶25 U/g，静脉注射。 1.1.2 标本收集：大鼠模型制成后在2、6、12、24小时分批麻醉由下腔静脉抽血3 ml，并用5% ETDA-Na2抗凝，3 000 r/min离心，取上清液，放置-70℃保存，同时取左肾放入10%福尔马林中保存。 1.2 检测项目 1.2.1 血浆TXA2/PGI2的测定和血浆TNF-α的测定：TXA2生物半衰期约30分钟，迅速代谢为无活性的TXB2，PGI2生物半衰期约3分钟，迅速代谢为6-酮-前列环素F1α（6-Keto-PGF1α），难以直接测定TXA2/PGI2。目前国内外均以放射免疫法测TXB2/6-Keto-PGF1α作为判断其浓度的指标。血浆TNF-α的测定：以放射免疫法测定。TXB2试剂盒、6-Keto-PGF1α试剂盒、TNF-α试剂盒均购自301医院东亚免疫技术研究所。 1.2.2 肾脏组织学检查：肾脏组织经石蜡包埋，切成4 μm厚，切片行HE染色后，利用盲法由病理医师在光镜下观察病理学改变，分级标准按文献报道[3]。 2.3 数据处理:采用SSPS11.5统计软件包对TNF-α、TXA2/PGI2 水平的计量资料进行Post Hoc检验；肾脏组织损伤程度的等级资料用非参数统计法的Kruskal-Wallis test检验。相关分析：计量资料与等级资料间采用Spearman相关分析。 2 结果 2.1 TXA2（TXB2）水平：见表1。 2.4 病理学检查：C组大鼠肾脏组织未见明显病理变化或偶有肾小管上皮浊肿，但细胞界限清楚，管腔存在，间质无淤血水肿；P组大鼠有肾小球淤血，肾小管上皮明显变性，细胞界限模糊管腔变窄或闭塞，可见少量的片状肾小管上皮坏死；T组肾小球少量淤血，肾小管上皮浊肿，偶有变性，管腔变窄减轻，很少片状肾小管坏死。与C组相比，P组肾脏组织病理有明显改变（P＜0.01）,但T组病理改变与同时段P组相比改善较明显（P＜0.05）。 2.5 相关分析：Spearman相关分析显示，Ｐ组血清TXA2/PGI2、TNF-α与肾脏组织损伤程度间均呈高度正相关(ｒ=0.398，0.476。Ｐ0.05）。 原因可能为：(1)本次实验中尿激酶的使用是于SAP模型制备后30分钟单次静脉给药引起的，因此治疗效果较短暂， 24小时时段血流量增加不明显；（2）SAP时引起肾脏血流量的改变的因素有多种，对于低血容量及其它因素引起的肾血管收缩，尿激酶的作用不大。提示如能改用连续静脉给药或多次静脉给药，并且应联合其他药物对重症胰腺炎进行综合治疗，可能提高治疗效果，提示将尿激酶应用于临床治疗SAP伴发肾损害患者的可能性。尿激酶并无直接对炎症介质的作用，本实验应用尿激酶后T组各时段TXA2/PGI2及TNF-α的水平较P组各时段水平明显降低（P＜0.01），可能为尿激酶改善胰腺微循环及全身微循环，减轻组织或器官损伤，使炎症反应减弱而间接引起的。 参考文献： [1] Raffaele P,Rosa C,Bhajat B,et al.Immune-Manipulation of the Inflam-matory Response in Acute Pancreatiti