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电针不同留针时间对隔区一氧化氮合酶表达影响(皖南医学院解剖教研室，安徽芜湖241001) [摘要] 目的：探讨不同留针时间与疗效的关系。方法：将40只实验大鼠随机分为5组：电针“足三里”穴5 min、15 min、30 min、60 min组和对照组，电针组大鼠分别电针“足三里”穴5、15、30、60 min，对照组大鼠不电针。采用还原型辅酶Ⅱ黄递酶(NADPH―d)组织化学方法结合计算机图像分析技术观察隔区各亚细胞群一氧化氮合酶(NOs)阳性神经元的变化。结果：电针5 min组与对照组相比，隔区NOS阳性神经元无明显变化(P0．05)；电针15、30、60 min 3组与对照组相比，隔区部分亚细胞群(隔内侧核、隔外侧核、斜角带核垂直支)NOS阳性神经元数量增加(P0．05)。结论：电针留针时间延长至15 min才引起隔区NOS表达增强，并随留针时间延长至60 min，隔区N0S表达维持在同一水平。 [主题词]电针；留针；一氧化氮合成酶／针灸效应；脑隔区／针灸效应 有报道表明电针能使中枢和周围神经系统内某些神经递质的合成和释放发生改变，电针后不同时程机体细胞的胞吐作用(运输小泡通过与细胞质膜的融合将内容物释放到细胞外基质的过程)及机体的免疫力均存在差异。临床资料也说明电针留针时间的长短对某些疾病的疗效有所不同。隔区是针刺镇痛的主要脑区之一，可分为隔内侧核(Sm)、隔外侧核(S1)、斜角带核垂直支(VDB)、斜角带核水平支(HDB)、隔三角核(Ts)和隔伞核(Sf)，内含大量的一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元，而一氧化氮(NO)又参与痛觉的调控，因此，电针及电针时程对隔区NOS阳性神经元的影响值得探讨，目的是为隔区的机能研究及NO参与痛觉调控的生理机制提供进一步的形态学依据，为临床针灸中留针时间长短与疗效之间关系的研究提供理论依据。 1　材料和方法 实验用成年SD大鼠40只，由南京医科大学动物中心提供：苏动(质2002―0031)，雌雄不限，体重200～250 g。将动物随机分为电针“足三里”穴5、15、30、60 min组和对照组，每组8只。 电针组动物分别电针“足三里”穴5、15、30、60 min，电针强度为3 V，频率8 Hz，波宽1 ms，以动物后肢出现轻微抽动为准。动物电针后进行灌注固定，先用生理盐水150 mL经左心室快速冲洗后，应用含1％多聚甲醛、1．25％戊二醛的0．1 mol／L磷酸缓冲液400 mL(pH 7．2～7．6)持续滴注40 min，取脑入含20％蔗糖的磷酸缓冲液，4℃冰箱过夜，次日冰冻冠状切片，片厚40／am，取隔区片。切片经0．01 tool／L的磷酸盐缓冲液(PBS)清洗，人含1 mmol／Lβ―NADPH―d(Sigma公司)；1．2 mmol／L硝基四氮唑蓝(上海华美试剂公司)和0．3％tri―tonx-100的0．1 mol／L磷酸缓冲液(pH 8．0)内，37℃温箱湿育1h后，将切片移入0．01 mol／L的PBS内清洗、贴片、脱水透明封片。通过计算机图像分析系统观察隔区各亚细胞群NOS阳性神经元的数量、形态、染色深浅等。每只大鼠隔区的每个亚细胞群分别取切片3张，每组每个亚细胞群共观察切片24张。 对照组动物，除了不电针“足三里”穴，其余过程与实验组完全相同。 对所得结果采用SPSS 11．0统计软件进行统计学分析，数据用均数±标准差(　±s)表示，组间比较采用配对t检验。 2 结果 NOS阳性神经元被染成紫蓝色，胞体、树突、轴突均着色。电针“足三里”穴5 min组大鼠，隔区各亚细胞群NOS阳性神经元在分布、染色深浅、数量上与对照组相比均无明显差异(见图1、图2、表1)。以Sm为例，两组分别随机计数100个神经元，其深染细胞数分别为57个和54个。 电针“足三里”穴15、30、60 min 3组，与对照组相比，隔区部分亚细胞群(Sl、Sm、VDB)的NOS阳性神经元的数量增多，染色程度加深，细胞密度变大，突起较清晰，但15、30、60 min 3组之间隔区NOS阳性神经元的差别则不明显(见图3～图5、表1)。以Sm为例，3组分别随机计数100个神经元，其深染细胞数分别为85个、83个和88个。 通过计算机图像分析系统，统计上述各组Sm内100个NOS阳性神经元的平均灰度值可见，与对照组相比，电针5 min组NOS阳性神经元的平均灰度值无明显变化；电针15、30、60 min组的NOS阳性神经元的平均灰度值与对照组相比较，明显降低，差别有非常显著性意义；而电针15、30、60 min 3组之间相比较，NOS阳性神经元的平均灰度值变化则无明显差异(见表2)。 3 讨论 NO是气体信使分子，在体内不稳定，由