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兰花病毒研究进展 摘要：建兰花叶病毒(CyMV)、齿兰环斑病毒(ORSV)是危害兰花的主要病毒。文章综述了这两种重要兰花病毒的传播和病害现状、生物学特性、检测技术及防治方法的研究进展。 关键词：建兰花叶病毒；齿兰环斑病毒；检测；逆转录PCR 引言 兰花具有很高的观赏价值和经济价值，还能熏茶、佐食、药用。全世界兰属植物约50余种，主要分布在东亚、南亚、东南亚和澳洲北部地区[1]。近年来，由于病毒病的发生和蔓延，兰花产业受到了很大的危害。兰花感染病毒后，可造成植株叶斑或坏死、花叶畸形，花穗短小、花期缩短、花瓣变色等症状，严重影响其品质。齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus，ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus，CyMV)是危害兰科植物的两种主要病毒。国内外对这类病毒的传播、生物学特性、检测技术以及防治措施等进行了许多研究,对兰花病毒的认识逐渐成熟。本文就近年来国内外兰花病毒病的研究进展作一概述。 1 兰花病毒的传播及病害现状 病毒的传播可分为介体传播和非介体传播。兰花病毒的介体很多，主要有介壳虫、蜗牛、蚜虫、螨类、蚯蚓、蚂蚁、潜叶蝇、粉虱等。另外，兰花病毒还可通过机械传播(如摩擦损伤、切花)和种子传播。周国辉[2]等推断，我国兰花上的CyMV是通过种苗的引进从国外传入的。理由是： = 1 \* GB3 ①人们未能在自然生长的野生兰花中发现CyMV； = 2 \* GB3 ②病毒均为被动传播，传播距离一般较短。远距离扩散的唯一途径是人为引种； = 3 \* GB3 ③我国沿海地区兰花CyMV感染率明显高于内陆地区，而且内陆山区或交通不便地区的兰花上尚未发现CyMV。 迄今为止，已报道可以感染兰花的病毒达28种之多，其分布情况差异很大，如建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒几乎遍及全世界。从国外引进的热带兰病情比较严重。目前，危害我国云南[3]、浙江[4]、广东[5]、海南[6]等地兰花的病毒主要是CyMV和ORSV。其中CyMV均为优势种，检出率不低于29.5%。CyMV和ORSV复合侵染的情况也普遍存在。 2 生物学特性 2.1 理化性质 CyMV失毒温度为60～65℃，稀释终点为1×10-3～1×10-4，室温下，体外存活期超过10d。提纯病毒粒体线状，长约470～490nm，宽为13nm[7]。 ORSV的稀释限点为5×10-5，致死温度为92℃～94℃，体外存活期超过3个月。提纯病毒为长约300nm，宽约18nm杆状粒体。SDS电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa[8]。 2.2 症状类型 自然病株的症状表现主要有两大类：一类为叶片褪绿斑驳、褪绿块、环斑或条纹，有的于褪绿处叶片变薄，组织由淡绿到灰白，干缩、破裂成丝；另一类表现为叶片上呈墨色斑点，还有不规则坏死块、线纹。在兰花适宜生长季节，新长的叶片症状更明显[5]。 感染ORSV病株叶片的症状表现为白色丝条纹、褪绿、黄黑斑等。感染CyMV植株的叶片症状表现为褪绿条斑、密集小黑斑、凹陷灰白条斑等。卡特兰感病后叶片出现褐色至黑紫色的局部坏死，有时花上产生褐斑。蝴蝶兰感病后新叶出现圆形或条形的黄斑，随着叶片生长，黄色变为黑褐色，花瓣和花曹有时出现皱褶。大部分在叶片上形成坏死斑或花叶状。由于叶绿素受到破坏，光合作用受阻，导致植株生长缓慢，花朵变小或畸型[9]。另有研究发现，CyMV单独侵染对兰花生长影响不是很大，但与其它病毒复合侵染则产生坏死、矮化、花色不鲜等症状[10]。 2.3 寄主范围 明艳林[8]等从表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的齿兰环斑病毒通过摩擦接，能够侵染苋色藜、昆诺阿藜、普通烟、心叶烟、番杏、千日红等4科8种指示植物。而从褪绿斑驳的蝴蝶兰(Phalaennopsis sp.)中提取的建兰花叶病毒能侵染望江南、香杏、曼陀罗3科3种植物[7]。 CyMV易侵染蝴蝶兰、卡特利亚兰、文心兰、墨兰、建兰、皇后兰、蜘蛛兰；ORSV易侵染蝴蝶兰、卡特利亚兰、文心兰、大花蕙兰、建兰、秋兰；卡特兰、蝴蝶兰的复合感染率较高；石斛兰感病率较低，对两种病毒具较强的抗性。洋兰品种病毒携带率远远高于国兰,基地种植的兰花病毒携带率高于野生兰[11][6][9][4]。 2.4 遗传和变异 CyMV隶属线形病毒科(Flexiviridae)、马铃薯X病毒属(Potexvirus)，病毒RNA基因组全序列约6200nt，与该属的其他成员有很高的同源性。整个基因组由5个开放读码框架(ORF)构成，分别编码160kD、26kD、13kD、10kD和24kD蛋白；其中CP基因是完整的ORF5框，长约700nt，编码24kD的外壳蛋白包被核酸形成长约470～580nm的线状病毒粒子。ORSV隶属烟草花叶