深海宏基因组文库克隆子发酵产物的生物活性筛选.PDF

中国生物工程杂志 深海宏基因组文库克隆子发酵产物的 生物活性筛选 汤熙翔 易志伟 李 宁 马群 李 慧 秦 丹 肖 湘 厦门大学生命科学学院厦门 国家海洋局第三海洋研究所厦门 摘要 目的 对前期构建的深海宏基因组文库克隆子发酵产物进行生物活性筛选 方法 利用 法及琼脂扩散法和双层琼脂法进行了细胞毒活性及抗菌活性筛选利用荧光定量法进 行了抗乙肝病毒活性筛选 结果筛选发现 个具有细胞毒活性的混合克隆子 指纹图谱 分析表明这 个混合克隆子具有与大肠杆菌宿主对照不同的指纹图谱其活性与出现的指纹峰成 分可能相关 结论研究结果提示对深海宏基因组文库克隆子发酵产物进行化学筛选为常规的 生物活性功能筛选之外的有意义途径 关键词深海宏基因组生物活性筛选指纹图谱 中图分类号 深海占地球表面积的 是地球表面最大的生 生物基因资源在生物活性物质研发中的利用提供了广 物栖息场所深海微生物处于高压低温部分区域如 阔的平台 热液口为高温 厌氧极端梯度高盐浓度高金属 本研究对课题组前期构建的深海热液口样品宏基 浓度无光照寡营养高卤素等特殊极端环境中由于 因组文库发酵产物进行了抗肿瘤细胞毒 抗菌抗病 其生态环境的特殊性决定了深海微生物具有一些特 毒活性的功能性筛选及指纹分析为后期分离鉴 异的代谢途径和遗传背景导致深海微生物次生代谢 定来源于深海宏基因组文库的生物活性化合物提供了 产物具有化学结构奇特新颖生物活性多样等特 良好基础 点 深海微生物资源是生物活性天然产物的一个良 好来源 材料和方法 典型深海特征为低温 和高压 最高达 样品来源试剂及设备 据估计在此极端条件下深海环境中可培养 本文所用建库样品为 年 月至 月中国大 微生物还不到 年宏基因组技术的正 洋协会 与美国首次联合科学考察中 式出现为开发利用这些不可培养微生物资源提供了新 采集的东太平洋 洋脊段 的途径 截止到 年度通过高通量测序获得的 热液场烟囱硫化物 米 利用该样品课题组前期 宏基因组数据表明不同生境的原核微生物宏基因组序 构建了宏基因组文库包含 个克隆子插入宏基 列所编码的蛋白序列大部分是未知功能的 这提示 因组片段为 指示菌枯草芽孢杆菌 我们利用宏基因组技术筛选新的生物活性物质具有很 金黄色葡萄球菌 大潜力 近来随着高通量测序技术的飞速发展对环