百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究-园艺学报.pdf

园　艺 　学 　报 　2008, 35 ( 11) : 1653 - 1660 A cta Horticu lturae Sin ica 百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研 究 孙红梅 , 赵 　爽 , 王春夏 , 王锦霞 , 赵 　波 , 陈丽静 (沈阳农业大学园艺学院 , 辽宁省设施园艺重点实验室 , 沈阳 11016 1) 摘 　要 : 经 40% ～75%硫酸铵分级沉淀和 D EA ESep haro se离子交换层析 , 从兰州百合 (L ilium david ii var. un icolor) 鳞茎中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 ( PAL ) , 纯化倍数为 1319 , 酶回收率 468% 。纯化的 PAL 经 SD S - 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SD SPA GE) 检测为单一蛋白带 , 其亚基分子量约 587 kD 。酶学性质研究 表明: 百合鳞茎的 PAL 不耐碱 , 更不耐酸 ; 随着水浴时间延长和水浴温度提高 , PAL 活性逐渐降低 , 但 40 ℃水浴 30 m in后酶活性仍保留 47% ; 以 L - 苯丙氨酸为底物 , 40 ℃下的 Km 值为 4 1 ×10 - 3 mol ·L - 1 ; 金 2 + 2 + 2 + 3 + 属离子 M n 、Fe 、Cu 、Fe 促进 PAL 活性 , 在供试范围内的最佳处理浓度分别为 10、10、20 和 - 1 + 2 + 2 + + 10 mmo l ·L , A g 、Co 、Ca 抑制其活性 , 其中 A g 的抑制作用最强 。 关键词 : 兰州百合 ; 鳞茎 ; 苯丙氨酸解氨酶 ; 纯化 ; 酶学性质 中图分类号 : S 682 2　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2008) Separa tion and Pur if ica tion a s well a s Properties of Pheny la lan ine A m m on ia lya se in L ily Bul b s SUN Hongm ei , ZHAO Shuang, WAN G Chunxia, WAN G J inxia, ZHAO Bo, and CHEN L ij ing ( Key L abora tory of P rotected H orticu ltu re of L iaon ing P rovince, Colleg e of H orticu ltu re, S heny ang A g ricu ltu ra l Un ivers ity, S heny ang 11016 1, Ch ina) A b stract: Phenylalan ine ammon ialya se ( PAL ) wa s iso lated and pu rified from lily (L ilium david ii var. un icolor) bu lb s via p recip itating w ith ammon ium su lp hate grading from 40% to 75% and D EA ESep haro se ionexchange chrom atograp hy tec