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第五章原核基因表达的调控 1调控水平 DNA水平：启动子，终止子，SD序列，重排 转录水平：mRNA 转录后水平：mRNA加工，翻译水平 2调控机制（转录水平）正控诱导 正控阻遏 负控诱导 负控阻遏 2.1乳糖操纵子 P0:调节蛋白基因启动子I:调节蛋白基因P:启动子O:操纵区（与P有重叠）Z:β-半乳糖苷酶基因Y:β-半乳糖苷透过酶基因A:已酰基转移酶基因 （1）I 产生的蛋白质是一种阻遏蛋白，其四聚体可与O区结合，从而阻止了RNA聚合酶与启动子P的结合，Z、Y、A无法转录，表达被抑制 (2）加入乳糖后，乳糖在β-半乳糖苷透过酶作用下进入细胞内，由β-半乳糖苷酶作用形成异构乳糖，异构乳糖与调节蛋白结合使之失活，从而暴露启动子P， Z、Y、A大量表达 2.3本底水平表达 在非诱导状态下有少量的lac mRNA合成（大约每个世代1-5个mRNA分子），这种合成称为本底水平的组成型合成。原因：阻遏物的结合并不是绝对紧密，即使在它与操纵基因紧密结合时，也会偶尔掉下来；这时启动子的障碍被解除，RNA聚合酶开始转录。这种现象以每个细胞周期1-2次的概率发生。 2.4葡萄糖对乳糖操纵子的影响 葡萄糖代谢物阻遏效应： 葡萄糖与乳糖共存时，与乳糖代谢有关的酶不表达，乳糖不被利用。 原因：乳糖操纵子启动子上又有一个CRP结合位点，该位点与cAMP-CRP(代谢物激活蛋白)复合物结合从而激活乳糖操纵子，但在高葡萄糖浓度下，cAMP水平降低，从而减少了cAMP-CRP复合物的水平，乳糖操纵子被抑制，反之被激活 cAMP-CRP复合物对于乳糖操纵子的转录是必须的，且与阻遏体系无关，该复合物缺失时，在任何状况下都不会转录。该复合物与启动子取得结合可以使DNA链发生弯曲，有利于形成稳定的开放型启动子-RNA聚合酶结构。阻遏物则是一个抗解链蛋白，阻止形成开放结构，从而抑制RNA聚合酶的功能。 2.5色氨酸操纵子 R:调节蛋白基因 P:启动子 O:操纵区 L:前导区 E: D: C: 色氨酸合成所需部分酶蛋白的基因 B: A: 2.6色氨酸操纵子的阻遏作用 1)环境缺少色氨酸： 调节蛋白无法与Trp结合，无活性，操纵子正常转录。 2)环境缺少色氨酸： 调节蛋白与Trp结合，被活化，操纵子转录被抑制。 2.7弱化作用 阻遏作用可使转录降低70倍，但实际色氨酸 高浓度与低浓度下trp操纵子的表达水平相差约600倍。因此色氨酸操纵子得转录还有另一种机制进行调控，这一机制即弱化作用 2.8前导序列特征（图见书上）1）含有起始密码子（AUG）和终止密码子（UGA），可翻译形成一个含14个氨基酸的多肽，即前导肽。 2）前导序列含两个相邻的色氨酸密码子，构成前导肽10位与11位上两个色氨酸。 3）①区与②区，②区与③区， ③区与④区可配对形成茎环结构。 4） ③区与④区配对可形成不依赖ρ因子的终止子。 2.9 弱化作用机理 1）环境中色氨酸浓度较高时，未受阻遏作用的操纵子将利用色氨酸合成前导肽，核糖体可在④区转录前运动到终止密码子UGA处，从而覆盖②区，于是③区和④区配对形成终止子结构，从而终止转录。 2）环境中色氨酸浓度较低时，核糖体在经过两个相邻的色氨酸密码子时发生停顿，从而覆盖区，此时区与区配对，无法形成终止子结构，转录顺利进行。 弱化作用的产生需要色氨酸操纵子转录与翻译在时空上的高度协调，在核糖体到达区时，RNA聚合酶刚好到达终止子处尔发生终止作用，这一协调是通过弱化子前的暂停位点控制的，此位点可使聚合酶发生停顿从而达到时空的一致 弱化子（attenutor）：原核生物中一类靠弱化作用而终止转录的特殊终止子。 2.3.3弱化与阻遏的协调 1）Trp浓度较高时发生弱化作用，弱化效率高，但弱化需要前导肽合成，而阻遏不需要前导肽合成，而阻遏时不需前导肽合成，因此阻遏更为节省。 2)阻遏蛋白只能作用于转录的起始，但转录开始后，阻遏蛋白无法作用，这是需要终止子作用。 3）缺少Gly时，前导肽也不合成， ①区与②区配对，③区与④区配对，Trp合成也终止。 3其他操纵子 3．1半乳糖操纵子 3．2阿拉伯糖操纵子 4其他水平调控 4.1转录起始的调控 SD序列：原核生物蛋白质基因前导序列中距第一个起始密码子7个bp的一部分或全部连 续多聚嘌呤核苷酸序列 SD序列是核糖体结合位点的一部分，可于16S