从愈伤组织再生二倍体植株.PPT

步骤 （1）四倍体母本的获得： 用0.2～0.4％的秋水仙素液体将二倍体普通西瓜的种子浸泡12～24小时，或在每天下午6～7点钟用 0.22～0.44％的秋水仙素液体滴在其幼苗茎尖生长点上，连续进行四天。令二倍体西瓜植株细胞染色体成为 4倍体（4n＝44），这种4倍体西瓜能正常开花结果，种子能正常萌发成长。 （2）处理后的种子或幼苗，要用清水洗干净。处理及缓苗期间，应将植株置于散光下，以免日光直接照射，致使秋水仙素分解破坏。同时亦切忌高温，因为在高温情况下，秋水仙素对植物的毒性增强，容易造成死苗。因此，在成活前应给予良好的栽培条件和精心管理。 （3）多倍体的鉴定： ①用秋水仙素溶液处理后，应注意观察多倍体植株。若形成多倍体，它萌芽的肥厚度明显增加，幼根尖端发生膨大现象； ②考察植株的体型，多倍体具有体型较大的特点。如叶片较大，根茎变粗，花、果实、种子都较大，茎叶组织比较粗糙，颜色深绿，有时有皱缩现象； ③四倍体叶面的气孔较大，单位面积气孔数目相对减少，花粉粒较二倍体的花粉粒大一倍以上； ④为了鉴定的准确起见，尚须直接在显微镜下检查染色体数目是否已经加倍(普通二倍体西瓜2n=22，四倍体西瓜4n= 44)。 （4）三倍体西瓜制种：用四倍体西瓜作母本，授以二倍体的花粉粒，结出三倍体的西瓜种子(存在于四倍体的子房发育成的西瓜中)。 小面积制种，按照西瓜开花习性，在每天下午按时套袋(防止自由传粉)。第二天早晨进行人工授粉，同时挂上标记。大面积制种时则需要分区隔离，按一定比例培植四倍体母本和二倍体父本的植株，且要及时为母本去雄使四倍体植株接受二倍体父本植株的花粉，以产生三倍体种子备用。 （5）在第二年，将三倍体种子与二倍体种子间种，自然或用人工的方法，让二倍体花粉刺激三倍体植株的子房发育成西瓜，即成三倍体无籽西瓜。 在大田生产中三倍体种子也可以不与二倍体种子间种，而是只种三倍体种子。在其植株开花期间，用低浓度2.4-D(2---4---二氯苯氧乙酸)喷洒在花蕾上，使子房发育成无籽西瓜果实。 第一年得到的西瓜应是四倍体西瓜，其中的种子是三倍体的。确切地说，该种子的胚是三倍体的，而种皮则是四倍体的(该种皮由四倍体的珠被发育而成)。 第二年得到的西瓜才是三倍体西瓜，其内无籽确切地说是只有种皮(三倍体的胚珠发育而成) 而无胚(授粉不受精，不能形成受精卵，因而无胚）。 一、定义 单倍体：细胞中含有正常体细胞的一半染色体数，即具有配子染色体数目的个体。 思考题4：单倍体是不是就是一倍体？ 水稻是二倍体,其单倍体是一倍体(n=x=12) 普通烟草是异源四倍体，单倍体是二倍体（n=2x=Ts=24） 普通小麦是异源六倍体，单倍体是三倍体（n=3x=ABD=21） 第二节 单倍体植物 二、特点 二倍体杂合植物两套染色体： 显性基因（dominant gene）：控制显性性状发育的基因。在二倍体生物中，杂合状态下能在表型中得到表现的基因。 隐性基因：支配隐性性状的基因。在二倍体的生物中，在纯合状态时能在表型上显示出来，但在杂合状态时就不能显示出来的基因。 由于单倍体只具有一套染色体，染色体上的每个基因都能表现相应的性状，所以极易发现所产生的突变，尤其是隐性突变，所以单倍体是进行染色体遗传分析的理想实验材料。 由于通过人工方法使单倍体的染色体加倍就可以获得纯合二倍体，因此在育种上具有极高价值。 思考题5：单倍体是否也高度不育呢？ 由配子产生的个体高度不育，原因是配子中的染色体减数分裂时随机向两极移动,只有到达一极的染色体完全时,配子才是可育的。 在减数第一次分裂的中期，它们的染色体都是单倍体，没有可以配对的同源染色体，是被随机的分向两极，每一条染色体分到这一极或那一极的机会都是1／2 (n-1)，例如：对于一组的12条染色体都分到一极的机会是 1／1024，可见单倍体是高度不育的。 三、单倍体产生原理与方法 假受精：远缘花粉刺激未受精卵细胞分裂发育成单倍性的胚。 组织培养：花药、花粉（雄配子）、未授粉的子房胚珠（雌配子）的培养。 雄核发育(Androgenesis)或孤雄生殖：卵细胞不受精，卵核消失，或卵细胞受精前失活，由精核在卵细胞内单独发育成单倍体，因此只含有一套雄配子染色体。这类单倍体的发生频率很低。 雌核发育(Gynogenesis)或孤雌生殖：精核进入卵细胞后未与卵核融合而退化，卵核未经受精而单独发育成单倍体。 四、植物单倍体与纯合二倍体 花药和花粉培养（Anther and pollenpulture）指离体培养花药和花粉，形成花粉植株，从中鉴定出单倍体植株并使之二倍化的细胞工程技术。 由于花粉（雄配子，n）的染色体只有体细胞的一半，因此获得的植株是单倍性的。 1.利于得到纯合体——单倍体加倍、后代性状一致，利于加快纯 合的二倍体的筛选时间。