四种核酸染料在琼脂糖凝胶电泳中染色特性的比较分析论文.doc

四种核酸染料在琼脂糖凝胶电泳中染色特性的比较分析毕业论文 目录 摘 要 I ABSTRACT II 第一章 绪 论 1 1 DNA的琼脂糖凝胶电泳 1 1.1 琼脂糖凝胶电泳概况 1 1.2 影响电泳因素 1 1.3 电泳方法 3 2选题背景 4 2.1 立题依据及研究意义 4 2.2 研究领域发展现状及展望 5 3多种染料概况 5 3.1 EB 5 3.2 GelRed 5 3.3 GenGreen 6 3.4 SYBR Green? 6 第二章 实验材料与方法 8 1材料及仪器 8 1.1实验试剂 8 1.2实验仪器 8 1.3实验用品 9 2实验方法 9 2.1 试剂准备与配制 9 2.2 琼脂糖凝胶的制备 10 2.3 点样与电泳 12 2.4结果观察与记录 13 第三章 实验结果与分析 14 1电泳分析 14 1.1胶染法(TBE为缓冲液) 14 1.2胶染法、以TAE为缓冲液时 18 1.3泡染法、以TBE为缓冲液时 22 1.4 泡染法、以TAE为缓冲液时 26 2不同染料比较分析 30 2.1视觉效果 30 2.2毒性 32 2.3 对DNA的迁移影响 33 2.4 可重复利用率 33 2.5稳定性 33 2.6时间成本 34 2.7价格 34 3实验结果 34 第四章 讨论 36 1实验注意事项 36 2问题及讨论 37 第五章 结 论 39 致 谢 40 参考文献 41 附页 43 摘 要 本实验采用琼脂糖凝胶电泳法，以不同浓度的λDNA作为样品，选用新型核酸荧光染料Gelred、GenGreen、SYBR Green?，以及传统染料EB，分别在TAE、TBE中，分别采用胶染法、泡染法进行染色，进行灵敏度、染色效果、染色时间等对比实验。 首先将λDNA母液稀释成多种浓度，通过预实验，确定了λDNA的浓度梯度为0.1、0.3、0.5、0.8、1 、3、5ng/ul。然后将此浓度梯度的λDNA溶液分别点样于TAE、TBE两种凝胶电泳体系中，进行电泳。另外采用胶染法和泡染法两种不同的染色方法。对染色效果、灵敏度、时间成本等进行对比分析。 结果表明，新型染料GenGreen，不仅操作简便、条带清晰、定量灵敏、价格适中，而且无毒、低致突变性，能更好的保证操作人员的健康和周围环境的安全。在本实验体系中能完美替代EB。 关键词：琼脂糖凝胶电泳；λDNA；EB；GenGreen；GelRed；SYBR Green?  ABSTRACT In this study, agarose gel electrophoresis will be taken.With different concentrations of λDNA as calibration solution,and 3 kinds of novel nucleic acid fluorescent dye:Gelred、GenGreen、SYBR Green?,In addition to the traditional dye EB.There will be two kinds of buffer solution:TAE and TBE.Precast gel staining and soak staining will be used.Sensitivity, dyeing effect, dyeing time and many other factors will be compared. First,the original liquor of λDNA will be diluted to various concentrations. The concentration gradient of λDNA is identified as 0.1,0.3,0.5,0.8,1, 3,5 ng / ul through the pre-experiments.Then the λDNA solutions of different concentration will be spotted on two kinds of gel electrophoresis system of TAE and TBE.Using two different staining methods:precast gel staining and soak staining.After electrophoresis and staining,comparing and analyzing dyeing effect, sensitivity, time costs,and so on. The r