人类豆吕联重复序列HUMTH01.PDF

遗 传 学报，23(3）：174一182,1996 .4ctaGenetica Sinica 人类短串联重复序列HUMTHOI 基因座的遗传多态性 侯一平 苟 清 吴梅绮 华（西医科大学法医学系 成都 610044) MichaelStaak MechiholdPrinz 琳 隆大学法医学研究所 德N科隆 50823) 摘要 作者用扩增片段长度多态技术分析了人类短串联重复序列HUMTHOI基因型及等位 基因频率在中国成都地区汉族群体和德国科隆地区白人中的分布。用同步电泳技术比较不 同引物PCR产物分型结果，评估不同实验室HUMTHOI群体数据的可比性。计算了25个 群体间HUMTHOISTR的遗传距离，并构建了系统树。HUMTHOISTR系统树分析不仅 与传统遗传标记结果一致，并且获得了群体遗传的新线索。 关键词 群体遗传学，短串联重复序列，遗传距离，HUMTHOI基因座，系统树，聚合酶链式 反应 短串联重复序列s（horttandemrepeats，简称STR）是由几个碱基对作为核心单位， 串联重复形成的一类DNA序列。主要由于核心重复单位数目的变化构成了STR基因 座的遗传多态性’【］。人类基因组中，平均每15kb就有1个STR基因座，提供了丰富的遗 传标记来源[I1。如果不同种族STR基因座等位基因频率不同，其等位基因分布能够代表 某一种族或某一群体特征，STR遗传标记就可作为人类学研究尤其是种族识别和分析基 因从一个群体向另一个群体流动的新手段。 HUMTHOI是位于人类染色体l1p15-p15.5酪氨酸经化酶基因第一个内含子内的 一个多态性STR基因座，由重复序列A（ATG)n[1〕构成。本文报道德国科隆地区白人和 中国成都地区南方汉族群体中HUMTHOI基因座等位基因和基因型频率分布。比较用 不同引物和不同等位基因分型标准物的分型结果，以评估不同实验室的群体资料，计算不 同群体间的遗传距离并构建系统树。重点讨论从系统树获得的新发现。 1材料和方法 1.1DNA提取 中国成都地区随机南方汉族 121份EDTA抗凝血样采自成都市无血缘关系个体，德 国科隆地区白人122份样本采自德国科隆市无血缘关系的献血员，用盐析[21或Chelex方 法131提取DNA. 本文为国家自然科学基金和卫生部青年科技人才专项基金资助项目。本文于1995年3月24日收到。 3期 侯一平等：人类短串联重复序列HUMTHOI基因座的遗传多态性 175 1.2 PCR扩增反应 采用Edwards等人1［1和Kimpton等人［］推‘荐的引物，Edwards的引物序列为 5’一GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT-3’和 5’-ATTCAAAGGGTATCTG- GGCTCTGG-3，而 Kimpton的引物序列为 5-GTGGGCTGAAAAGCTCCC- GATTAT-3’和5-GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC--3。每一扩增样本包含： 2-40ng人类基因组DNA,1xTaq缓冲液P（romega),1.5mmol/LM9Clz，每种核昔酸 150pmol/L,1UTaq聚合酶 P（romega)，上述两套引物中之一套，每种引物 0.25pmol/L，反应体积25u1。在热循环仪B（iometra）中循环28次，每次94C变性I分 钟，60℃退火1分钟，72℃延伸2分钟。 1.3PCR扩增产物的检测和等位基因确定 用聚丙烯酞胺凝胶水平不连续电泳分析PCR扩增产物。通过比较样本PCR扩增 产物的电泳谱带在人类等位基因分型标准物中的位置确定HUMTHOISTR基因型。人 类HUMTH01STR等位基因分型标准物由混合2.3个基因型不同个体的DNA，按 1.2”所述方法进行PCR扩增制备。制备的分型标准物与英国法庭科学研究中心提供的 等位基因分型标准物同步电泳比较，获得统一命名。 1.4 数据分析 群体数据的Hardy-Weinberg平衡吻合度检验按文献5【1方法进行，每一群体中观察 值为零的基因型合并为一组检验，用Nei氏公式[6l［计算遗传距离。按不加权对群聚