CD40CD40L系统对主动脉粥样硬化兔血浆黏附分子水平影响.docVIP

CD40CD40L系统对主动脉粥样硬化兔血浆黏附分子水平影响【摘要】目的探讨CD40CD40配体系统(CD40CD40L)对不同因素致动脉粥样硬化形成的血浆黏附分子影响。方法40只实验兔随机分为5组，每组8只。A组(正常对照组)：普通颗粒饲料喂饲；B组(高脂模型组)：高脂饲料喂饲；C组(高脂模型CD40阻断组)：高脂饲料喂饲同时给予抗CD40配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次；D组(免疫刺激组)：应用肺炎衣原体感染制备动脉硬化模型；E组(免疫刺激CD40阻断组)：制备模型的同时给予抗CD40配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次； 实验共16周。实验结束后，检查如下指标： ① ELISA法检测sCD40L、sVCAM1、sICAM1。斑块/内膜面积比。16周末获取标本检测分析。结果B、C、D、E组与A组比较sCD40L sVCAM1、sICAM1水平升高(P001)。C、E组与B、D组比较sCD40L、 sVCAM1、sICAM1水平降低(P001)。结论通过高脂饮食、免疫刺激可引起实验兔sCD40L、 sVCAM1、sICAM1水平升高，阻断CD40CD40L，可降低实验兔sCD40L、 sVCAM1、sICAM1水平，从而抑制炎症反应、延缓动脉粥样硬化进展。 【关键词】动脉粥样硬化；CD40CD40配体；可溶性细胞间黏附分子；可溶性血管细胞黏附分子 动脉粥样硬化(artherosclerosis;AS)是心脑血管疾病发病的重要病理基础，是多因素作用的慢性炎症性疾病，CD40CD40配体系统(CD40CD40L)是机体发生炎症反应过程中重要的信号通路［1］，推测抑制CD40CD40L系统可以抑制或减缓AS的发生、发展。本研究以不同机制制备AS模型，应用抗CD40配体抗体阻断CD40CD40L系统，观察高脂饮食、免疫刺激对实验兔血脂、可溶性CD40配体(sCD40L)、可溶性细胞间黏附分子(sICAM1)、可溶性血管细胞黏附分子(sVCAM1)的影以及阻断CD40CD40L后对上述指标的影响，探讨 CD40CD40L在动脉硬化形成中的作用，为临床治疗AS提供新的途径。 1材料与方法 11实验材料健康雄性日本大耳白兔40只，体重(20±015)kg，分笼饲养，由辽宁医学院实验动物中心提供。药品：胆固醇(北京邦定生物制药有限公司)；sCD40L、sVCAM1、sICAM1试剂盒(七海森雄科技实业有限公司产品)。仪器：全自动生化分析仪；OLYMPUS CH20型光学显微镜；CIAS1000图像分析仪等。 12实验方法 121实验动物模型制备与分组健康日本雄性大耳白兔40只，体重(200±015)kg，随机分为5组，每组8只。①正常对照组：普通颗粒饲料喂饲；②高脂模型组：高脂饲料喂饲。③高脂模型CD40阻断组：高脂饲料喂饲同时给予抗CD40L配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次。④免疫刺激组：应用肺炎衣原体感染制备动脉硬化模型，经鼻腔感染混有肺炎衣原体的SPG缓冲液05 ml，3周后再次感染。⑤免疫刺激CD40阻断组：制备模型的同时给予抗CD40L配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次；实验共16周。于第16周末检测指标。 122观察指标及测定方法①sCD40L、sVCAM1、sICAM1:应用ELSIA法检测。②病理形态学观察：动物麻醉后,剪开胸腔，以4e磷酸盐缓冲液(001 mol/L)灌洗主动脉至灌流液清亮为止，游离主动脉,取胸主动脉,分为3段，分别切取4Lm厚的标本制成病理切片,HE染色,采用图像分析系统测量斑块面积和内膜面积，计算斑块/内膜面积比。 13统计学分析用SPSS 130统计软件分析，所有计量资料用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用q检验，P005差异有统计学意义，P001差异有显著统计学意义。 2实验结果 21血清CD40L、sVCAM1、sICAM1 ：B、C、D、E组与A组比较sCD40L水平升高(P001)。C、E组与B、D组比较sCD40L浓度明显降低(P001)。见表1。 22斑块/内膜面积比： B组、C组、D组、E组实验兔主动脉均可见动脉粥样硬化斑块形成，C组与B组比较斑块/内膜面积比降低，E组与D组比较斑块/内膜面积比降低(P001)。见表2。 表1各组兔血清sCD40L、sVCAM1、sICAM1浓度比较(x±s，n=8) 组别sCD40L(ug/l)sVCAM1(ug/l)sICAM1(ug/l)A组101±018158±024458±0