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分光光度法测定芜菁中总黄酮含量【摘要】 目的 研究芜菁中总黄酮的最佳提取工艺并测定其含量，为芜菁资源的合理开发和利用提供科学依据。方法 以乙醇为溶剂，采用索氏提取，分光光度法测定芜菁中总黄酮的含量，并通过稳定性、精密度和回收率试验检验了该方法的可靠性和重现性。结果 标准液及供试液均在510nm处有最大吸收。回归方程：A=001853 c+007628，r=09998；平均总黄酮的含量：2797％，平均加样回收率：1016％；精密度和加样回收率的RSD值分别为: 085％,121％。本法具有操作简单，稳定,准确, 重复性好,灵敏度高，可作为芜菁总黄酮的含量测定法。 【关键词】 芜菁；总黄酮；分光光度法 作者单位：830011 乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科(梁永红 阿提合尼木 王松芝)；新疆医科大学药学院(海力茜·陶尔大洪) 通讯作者:王松芝 维药芜菁的植物学名为芜菁，来源于十字花科植物芜菁的块根，药食同源，历史悠久，疗效显著，可用支气管炎，食欲不振，消化不良的治疗。通过研究提示芜菁药材中含有皂苷，黄酮类，糖类及其苷，生物碱，内酯，挥发油，酚类，鞣质，氨基酸，蛋白质等化学成分［1］，并且研究了多糖的提取及含量测定，而其他相关性研究尚在进行当中。 本实验选用了新疆9个不同产地的芜菁药材，按照《中国药典》(2005)的相关规定进行实验并且采用荧光分析法对其总黄酮含量进行了测定［2］，旨在以评价药材的质量，并且为相关部门今后制定该药材质量标准时提供参考依据。 1 仪器与试剂 SX721分光光度计﹙上海第三分析仪器厂﹚；索氏提取器；回流提取装置。乙醇为分析纯；5%亚硝酸钠溶液,10%硝酸铝溶液,4%氢氧化钠溶液采用分析纯试剂自配；芦丁标准品﹙100080200707，中国药品生物制品检定所﹚。样品为新疆9个不同产地的芜菁药材 2 方法与结果 21 标准品溶液的制备［3］ 精确称取在105℃条件下干燥至恒定质量的芦丁标准品100 mg,置于100 ml容量瓶中,加入75%乙醇适量,微热溶解解,放冷后再加入75%乙醇稀释至刻度,摇匀,得质量浓度为010 g/L 的芦丁对照品溶液,低温保存,备用。 22 供试品溶液的制备［4］ 精密称取芜菁粉末10 g(过60目筛，60℃干燥至恒重)置索氏提取器中，加30 ml石油醚加热回流30 min，弃去石油醚提取液，利用余温挥干残留石油醚，然后加入30 ml体积分数75%乙醇加热回流120 min，过滤，滤液置100 ml容量瓶中，用75%乙醇定容至刻度。 23 测定波长的选择 精确量吸取对照品溶液和供试品溶液5 ml,分别置于25 ml 容量瓶中, 加入5%的亚硝酸钠溶液10 ml,摇匀,放置6 min,加入10% 硝酸铝溶液10 ml,摇匀,放置6 min,加4% 氢氧化钠溶液100 ml,再加入75%乙醇至刻度,摇匀，放置15 min，在波长200～700 nm范围内进行不断缩小范围的反复连续波长扫描，以确定波长。 24 标准曲线绘制 分别精确量吸取芦丁标准液0，10，20，30，40，50 ml置于25 ml 容量瓶中,加入5%的亚硝酸钠溶液10 ml,摇匀,放置6 min,加入10% 硝酸铝溶液10 ml,摇匀,放置6 min,加入4% 氢氧化钠溶液100 ml,再加入75%乙醇至刻度,摇匀,放置15 min,进样，在确定的波长处测定吸光度值(以不加标准溶液的相应溶液为空白对照)，得到标准液浓度(C)与吸光度(A)之间的回归方程。 25 正交实验设计 在预实验的基础上采用索氏提取法在质量，提取工艺相同条件下,考察了乙醇浓度,料液比,提取时间等因素的影响，采用正交表L9(34)安排实验，见表1。精密称取芜菁粉末10 g 于索氏提取器中进行正交实验，精密吸取5 ml于25 ml容量瓶中按上述“23”方法制成测定液，测定其吸光度值。 26 回收率试验［5］ 精密量取供试液1 ml，分别置于4只25 ml量瓶中，分别加入标准液030，040，050，060 ml，再照“23”项的方法制成测定液，测定吸光度值，计算测定液总黄酮浓度,平均回收率及RSD值。 27 样品含量测定 最佳提取条件下，照“22”项的方法制备成供试品溶液，精确量取供试品溶液5 ml,置25 ml 容量瓶中,加入5%的亚硝酸钠溶液10 ml,摇匀,放置6 min,加入10%硝酸铝溶液10 ml,摇匀,放置6 min,加4%氢氧化钠溶液100 ml，再加入75%乙醇至刻度,摇匀,放置15 min,以加标准溶液的相应溶液为空白对照，在确定的波长处测定吸光度值(A)，代回归方程计算总黄酮含量。