DNA连接酶与DNA聚合酶的比较.ppt

DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 不需要模板 需要DNA的一条链为模板 游离的DNA片段 单个的脱氧核苷酸 形成完整的DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 相同点 不 同 点 模板 作用 对象 作用 结果 用途 PCR技术与DNA复制的比较 DNA复制 PCR技术 解旋酶催化 DNA在高温作用下变性解旋 细胞内（主要在细胞核内） 细胞外（主要在PCR扩增仪内） DNA解旋酶、普通的DNA 聚合酶等 耐热的DNA聚合酶（Taq酶） 细胞内温和条件 需控制温度，在较高温度下进行 区 别 解旋 方式 场所 酶 温度 条件 合成的 对象 DNA分子 DNA片段或基因 联系 ①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成 ②原料：均为四种脱氧核苷酸 ③酶：均需要DNA聚合酶进行催化 ④引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧 核苷酸 基因工程的概念 基因工程的别名 DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的新的生物类型 和生物产品 目的基因导入受体细胞 微生物细胞 农杆菌转化法、 基因枪法、花 粉管通道法 显微注射法 常用方法 生物种类 体细胞或受精卵 将含有目的基 因的表达载体 提纯→取受精 卵→显微注射 →受精卵发育 →获得具有新 性状的动物 以农杆菌转化 法为例： 将目的基因插 入Ti质粒的 T-DNA上→农杆 菌→导入植物 细胞→整合到 受体细胞的DNA 上→表达 转化过程 植物细胞 动物细胞 Ca2+处理法 受体细胞 受精卵 原核细胞 Ca2+处理细胞→感受态细胞 →重组表达载体与感受态细 胞混合→感受态细胞吸收 DNA分子 目的基因的检测与鉴定 方 法 检测转基因生物染色体DNA分子上是否插入了 目的基因,采用DNA分子杂交技术 检测目的基因是否转录出了mRNA，采用分子杂 交技术 分子 水平 检测 导入DNA 分子 转录 翻译 除了分子检测外，还需要进行个体生物学水平 的鉴定，如做抗虫或抗病接种实验等 检测目的基因是否翻译成蛋白质，采用抗 原—抗体杂交技术 个体水平鉴定