植物基因转化的方法研究.docVIP

新疆农业大学 科学技术学院 本科生专业文献综述 题 目: 植物基因转化的方法研究 姓 名: 杨洪 专 业: 生物技术 班 级: 生技092 学 号: 095202409 座位号 : 06 指导教师: 苏秀娟 2012 年 5 月 15 日 新疆农业大学科学技术学院制 植物基因转化的方法研究 作者：杨洪 摘要:转基因植物的研究主要在于改进植物的品质，改变生长周期或花期等提高其经济价值或观赏价值；作为某些蛋白质和次生代谢产物的生物反应器，进行大规模生产；研究基因在植物个体发育中，以及正常生理代谢过程中的功能。 前言:转基因植物的研究最早始于20世纪八十年代，1983年全球第一例转基因烟草在美国问世，1996年美国最早开始商业化生产和销售的转基因作物，包括大豆、玉米、油菜、土豆和西红柿。 转基因作物的问世是为了解决我们实际的问题的，抗旱、抗盐碱作物为了增加耕地面积，抗虫抗病作物为了减少化肥农药的使用量，改良品质的转基因育种为了改善人民的生活，高能生物燃料为了解决未来的能源危机，世界范围内都在广泛重视并应用的转基因技术，我们只有掌握并充分利用他，才能在国际社会中立于不败之理。 1转基因植物 1.1 概念 转基因植物的研究主要在于改进植物的品质，改变生长周期或花期等提高其经济价值或观赏价值；作为某些蛋白质和次生代谢产物的生物反应器，进行大规模生产；研究基因在植物个体发育中，以及正常生理代谢过程中的功能。 以植物作为生物技术的实验材料有其特定的优点，那就是植物细胞大部分都有全能性(totipotency)，可以用单个细胞分化发育出整个植株。这样，经过基因工程改造的单个植物细胞有可能再生成一棵完整的转基因植株。这些植株还可通过有性生殖过程把改变了的性状遗传给下一代转化受体 植物基因工程用作外源基因的转化受体有许多种，包括胚性愈伤组织(cai—lus)、分生细胞、幼胚、成熟胚、受精胚珠、种子和原生质体等。从这些受体细胞都可获得再生的转基植株 2以外植体为受体的基因转化方法 2.1 农杆菌介导法 农杆菌介导法是最早应用、最实用有效并且具有最多成功实例的一种植物转基因方法[ 4]农杆菌是一类普遍存在于土壤中的革兰氏阴性细菌[ 5]。目前, 用于植物转基因介导的农杆菌是根癌农杆菌和发根农杆菌。某些根癌农杆菌和发根农杆菌分别含有大小为200—800bp的结构和功能相似的Ti质粒和Ri质粒。Ti质粒和Ri质粒含有3个功能区:参与农杆菌侵染植物过程的vir区、参与农杆菌基因整合到宿主植物基因组过程的T-DNA区、在农杆菌中启动质粒复制的ori区。在vir区上的vir操纵子群作用下, Ti质粒和Ri质粒能将自身的T-DNA转入宿主植物细胞内, 而后将T-DNA整合到植物基因组中。T-DNA是质粒上一段10—30kb的序列, 它的两端各有一段高度保守的25bp的同向重叠序列。由于T-DNA转化无序列特异性,因此可用任何基因片段代替原来的T-DNA基因片段进行。 2.1.1 农杆菌介导法的原理 在农杆菌基因chvA, chvB,pscA, andatt家族所编码的蛋白和植物口产生的酚类物质和糖类物质的共同作用下, 农杆菌识别并附着在宿主细胞壁上。virD4和virB基因编码蛋白组成的type IV分泌系统将单链VirD2-T-DNA复合体运送到宿主细胞内。此外, VirE3、VirE2和VirF蛋白也通过该系统进入宿主细胞质中。在宿主细胞质中, VirE2蛋白与VirD2-T-DNA复合体结合。在VirD2核定位信号、某些农杆菌蛋白和宿主细胞蛋白的共同作用下, VirD2-T-DNA复合体进入细胞核。在VirD2、VirE2、某些宿主细胞核蛋白如AtKu80和DNA连接酶的作用下, T-DNA被整合到宿主基因组中,但具体过程不详。 2.1.2农杆菌介导法的基本步骤 1.诱导目标植物外植体;2.构建含有目的基因的质粒;3.质粒导入合适的农杆菌菌株中及该菌株的活化过程;4.植物愈伤组织的微伤口处理及农杆菌侵染; 5.共培养及脱菌处理;6.愈伤组织筛选、分化与植株再生;7.再生植株及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测;8.转基因T1代的目标性状鉴定[6]。 2.1.3 农杆菌介导法的优点与缺点 具有操作简单、转化效率较高、重复性好、单拷贝整合、基因沉默现象少、转育周期短、转化片段较大且插入片段明显及实验费用低等优点, 因此, 农杆菌介导法是目前应用最广泛的一种植物转基因方法[ 7]。但是, 农杆菌介导法也存在一些问题。首先,在自然条件下,农杆菌只侵染双子叶植物。对于单子叶植物,虽然可以采用人工添加酚类物质的方法,诱导农杆菌完成侵染过程,但是单子叶植物