精氨酸加压催产素在无蹼壁虎脑的昼夜节律性表达探究.pdfVIP

精氨酸加压催产素在无蹼壁虎脑的昼夜 节律性表达研究 摘 要 生物的许多生化、生理和行为指标都呈现昼夜性的波动，这种接近24小 时周期变化的生物节律称为昼夜节律。生物体的昼夜节律性受昼夜节律钟 （circadian clock ）控制。以往的观点认为爬行动物昼夜节律钟最重要的中枢 是松果体及视网膜，所以研究者主要把精力放在松果体和视网膜上。近年的 研究表明，同时损伤侧眼（视网膜）、松果体（腺）后，多数蜥蜴类爬行动物 的生理功能及行为等仍具有明显昼夜节律性（Innocenti ，1993；Berk and Heath ， 1975；Tosini and Menaker，1998），而损伤下丘脑的某些核团可以完全破坏某 些爬行动物的昼夜节律，因此多数学者认为下丘脑可能也是爬行动物昼夜节 律钟重要的震荡器。垂体后叶激素是一类广泛存在于脊椎动物各等级类群的 古老激素，在哺乳动物中目前认为精氨酸加压素 （arginine vasopressin ，AVP ） 为生物钟的重要而稳定的输出信号和整合信号（Hofman ，2003 ； Dunlap ， 1999； Hastings et al ，2003 ； Maria ，2003 ），在不同光周期下其在视交叉上 核均呈现特征性的昼夜节律性表达。那么精氨酸加压催产素（arginine vasotocin ，AVT ）作为精氨酸加压素在爬行动物的同源物，其在无蹼壁虎 （Gekko swinhonis）下丘脑是否表达？其表达是否呈现昼夜节律性？不同的 光周期及不同温度下其表达是否有变化呢？ 运用免疫组织化学和数学形态学方法，我们发现在无蹼壁虎全脑AVP 免 疫阳性细胞主要分布在鲁卡斜角带核、视上核、室旁核，在室周视前区、终 纹床核，下丘脑外侧区、前脑外侧束、室周核出现零散的几个细胞；阳性细 胞形态多样，呈圆形、梨形、或双极形，但多以圆形为主，免疫染色主要位 于细胞质和细胞突起，细胞核不着色或浅着色。而 AVP 免疫阳性纤维除了在 嗅球、嗅束、大脑皮层、视叶、小脑皮层未见外，几乎贯穿全脑其他部位。 在进行全脑 AVP 免疫阳性细胞定位和纤维投射观察的基础上，我们选取 了在所有报道的爬行动物均有AVT 表达的两个核团（视上核与室旁核）进行 了数学形态学分析。在DD 、DL 、LL 三种不同的光周期下分别统计了视上核 与室旁核在 7 ：00，11：00，15：00，19：00，23 ：00，3 ：00 六个时间点 AVP 免疫阳性细胞的数目，结果发现在视上核阳性细胞数目没有显著变化， 而室旁核在三种不同的光周期下AVP 免疫阳性细胞的数目均呈现昼夜节律性 变化。打破冬眠期组（环境温度 12±3℃）在 DD 和 LL 光周期下，昼夜节律 变化曲线基本一致，均在 15：00 与 19：00 左右形成一个高峰，在 3 ：00 左 右形成一个小高峰，而两个波谷则分别出现在 7 ：00 和 23 ：00，与 DL 光周 期相比时相均提前了约 4 个小时，而且振幅相对较大；活动期组（环境温度 25±3 ℃）DD 与 LL 的曲线趋势也基本一致，均在 19：00 左右形成一个高峰， 在 3 ：00 左右形成一个小高峰，而两个波谷则出现在 7 ：00 和 23 ：00，与 DL 相比，DD 与 LL 的时相也向前提前了约4 小时，这提示 AVT 的昼夜节律 表达可能是一种内源性现象，而光则可能作为调整因子参与这种昼夜节律与 外界环境的同步化。在相同光周期下，比较不同环境温度（即打破冬眠期组 与活动期组）对室旁核 AVP 阳性细胞数目的影响我们发现在DL 光周期下， 两者的昼夜节律变化趋势基本一致，但活动期组在各个时间点AVP 阳性细胞 数比打破冬眠期组均有显著上升，P ＜0.001，而在DD 和 LL 光周期下，打破 冬眠期组与活动期组阳性细胞数两组间未见明显差异，这提示温度对 AVT 的 表达调控需要光信号的协同效应。 关键词：无蹼壁虎；加压催产素；分布；昼夜节律； 室旁核；免疫组织化学 Study on circadian expression of arginine vasotocin in the brain of the lizard Gekko swinhoni