生物化学章16RNA的生物合成 (试讲课件1).ppt

第十六章; （1）掌握转录的概念和特点。 （2）掌握原核生物RNA聚合酶组成及功能、转录过程。 （3）熟悉真核生物RNA聚合酶功能，了解真核生物转录过程。 （4）了解真核生物的转录后加工和修饰过程。;本章内容;在生物界，RNA合成有两种方式;;转录 (transcription) 是生物体以DNA为模板合成RNA的过程。 ;转录的知识是理解许多生物学现象和医学问题所必需的。 对于RNA生物过程的调节可以导致蛋白质合成速率的改变，以及由此而引发的一系列代谢变化， 因此，了解RNA代谢的基本原理就甚为重要。这些原理既关系到所有生物是如何适应环境变化的，也关系到细胞结构和功能的分化机制。 ;复制和转录的区别;复制和转录的共同点:;原核生物转录的模板和酶 Templates Enzymes in prokaryotic transcription;参与转录的物质：;一、原核生物转录的模板;5′···GCAGTACATGTC ···3′;5? 3?;二、 RNA聚合酶催化RNA合成;DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。 RNA聚合酶和DNA的特殊序列——启动子(promoter)结合后，就能启动RNA合成。 ;（二）RNA聚合酶由多个亚基组成;核心酶 (core enzyme);RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合;?因子有多种：;原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子(operon)，包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。 ;调控序列中的启动子是RNA聚合酶结合模板DNA的部位，也是控制转录的关键部位。原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录，其中由σ亚基辨认启动子，其他亚基相互配合。 ;对启动子的研究，常采用一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。;根据对100多个基因碱基序列的分析，大肠杆菌的启动子至少两处共同顺序： 约12bp的RNA聚合酶全酶识别部位（-35顺序）， 和约含7bp的RNA聚合酶全酶紧密结合部位（-10顺序，又称为TATA框或Prinow box）.-10序列处的碱基富含AT，有助于DNA双螺旋的局部解链。 ;开始转录;启动子的结构（碱基序列）是不对称的，它决定着转录的方向。大肠杆菌转录启动子的一个理想序列如下： ;原核生物的转录过程 The Process of Transcription in Prokaryote;原核生物的转录过程可分为转录起始、转录延长和转录终止三个阶段。 ;RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。;2. DNA双链打开，形成开放转录复合体(open transcription complex) ；DNA分子接近-10区域的部分双螺旋解开后转录开始。 DNA双链解开的范围只在17 bp左右。 ;E.coli的转录起始和延长 ;第一个磷酸二酯键生成后，转录复合体的构象发生改变， σ亚基即从转录起始复合物上脱落，核心酶连同四磷酸二核苷酸，继续结合于DNA模板上，酶沿DNA链前移，进入延长阶段。 ;对?亚基脱落的不同说法-------------北大朱玉贤编《现代分子生物学》第4版教材P76;二、 RNA pol核心酶独立延长RNA链;大肠杆菌的转录泡局部结构示意;转录延长以下特点 ;转录过程中DNA的超螺旋结构变化;三、原核生物转录延长与蛋白质的翻译同时进行;依赖?因子的转录终止 非依赖?因子的转录终止;?因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 ?因子能结合RNA，又以对poly C的结合力最强，但对poly dC/dG组成的DNA的结合能力就低得多。 ?因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性。;?因子的作用原理（热追踪假说）：;（二） 非依赖 ?因子的转录终止;茎环结构使转录终止的机制;真核生物RNA的生物合成 The Biosynthesis of Eukaryote RNA;真核生物的转录过程比原核复杂。二者的转录起始过程有较大区别，转录终止也不相同。 ;一、 真核生物有三种DNA依赖的RNA聚合酶;真核生物的RNA聚合酶;真核生物RNA聚合酶的特点;二、转录因子在真核生物转录起始中具有重要作用 ;（一）转录前起始复合体的形成;; 转录起始时，真核生物的RNA pol不直接识别和结合模板的起始区，而是依靠转录因子识别并结合起始序列，故其起始复合体的装配过程比原核生物复杂的多。 ;能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，