微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量2011版.docxVIP

微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量(中山大学化学与化学工程学院，广州，510275)摘要　　本实验采用微波辅助萃取法快速萃取水果中的Vc，以3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液作为流动相，采用高效液相色谱法对Vc进行定量定性分析。实验中通过对比保留时间进行定性，定量分析采用校准曲线法，校准曲线的绘制表明Vc浓度在5-100mg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，检测结果准确。该方法具有试剂用量少、操作简单、分析速度快、结果准确等特点。关键词　微波辅助提取高效液相色谱维生素C1. 引言维生素C（VitaminC，Vc）又叫抗坏血酸，有酸味，溶于水，稍溶于乙醇，不溶于乙醚、氯仿、苯、石油醚、油类和脂肪。维生素C受光照则逐渐变为褐色，干燥状态下在空气中相当稳定，但若空气存在于溶液中则迅速氧化变质[1]。研究表明，Vc在体内参与多种反应，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用，人体内缺乏Vc时容易导致坏血病。Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50-300mg/100g。[2]下图是Vc的结构：图1维生素C的分子结构式分析维生素C的方法大致有以下几类：2，6-二氯靛酚滴定法、梯度比色法、荧光分析法、电位测定法、分光光度法等等，各种方法各有特点，有些方法要求的实验条件和操作技术较高，而有些方法步骤烦琐，不利于快速分析。在近几年的Vc研究中较常见的方法是高效液相色谱法。该方法具有较高的准确度、精密度和灵敏度，而且简便快速，更加适用于维生素C的测定。[3]本实验采用微波辅助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色谱进行分析，以Vc校准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。2.实验部分2.1仪器试剂2.1.1仪器高效液相色谱仪：LC-201AT；微波萃取仪（上海新仪微波化学科技有限公司）；色谱柱：依利特或PhenomenexC18柱(250mm×4.6mm，I.D.5μm)。2.1.2试剂乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；小西红柿、桔子或西红柿样品。实验用水为超纯水。Vc标准溶液：快速准确称取0.025gVc，用1mol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L标准溶液备用，现用现配。2.1.3色谱条件流动相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；柱温为室温，紫外检测波长265nm；进样量10μL。2.2 实验步骤2.2.1按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。2.2.2校准曲线绘制：分别配制 5，20，50，80，100 mg/L 的 Vc 样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析。以Vc 色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。2.2.3样品准备：准确称取小西红柿5.0006g、桔子5.0024、西红柿5.0220以1 mol/L乙酸50 mL 为萃取溶剂，微波功率设为自动，萃取时间为5min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次。萃取液过滤后用1 mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供试品溶液。2.2.4定性分析：分别取10μL 50 mg/L的Vc 标准溶液和供试品溶液，进HPLC 分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。2.2.5定量分析：供试品溶液经 0.45 μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC 分析。平行测定2次，记录其Vc 的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc 的含量，结果以 mg/100g表示。3. 实验结果与讨论3.1 实验结果3.1.1 校准曲线的绘制表1标准溶液的浓度及对应的峰面积浓度c/mg·L留时间t/min2.7712.7672.7822.8062.836峰面积A178151765478189245129599513869048根据峰面积对浓度描点，曲线拟合后得到以下校准曲线。浓度/mg·L-1峰面积图2　Vc峰面积-浓度校准曲线由图看出，所得校准曲线方程为：峰面积A=38228c/mg·L-1-16642，相关系数R2=0.9988。3.1.2 样品提取液色谱图分别以小西红柿、桔子、西红柿四种水果的提取液为样品，在如下色谱条件“流动相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；柱温为室温，紫外检测波长265nm；进样量10μL”下检测，得到色谱数据和色谱图如下：图3 小西红柿提取液HPLC色谱图图4 桔子提取液HPLC色谱图图5 西红柿提取液HPLC色谱图3.1.3