一短指家系临床特征调查及IHH基因的突变分析.pdfVIP

广东医学 2012年 10月第 33卷第 19期 GuangdongMedicalJournalOct．2012， ， !： ．2913 · S、62~C(或63~C)退火30s、72~C延伸 60S，35个循环， 等…对两个中国BDA1家系进行了全基 因组扫查，首 72℃延伸 5min。 次将 BDA1致病基因定位于2q35～2q36问8．1cM的区 1．2．3 PCR产物测序和分析 PCR产物回收纯化后， 域内。2001年，GAO等 在 3个无血缘关系的中国 经 ABI3130x／GeneticAnalyzer自动测序仪双向测序， BDA1大家系的患者中发现了3个错义突变，从而确定 用 DNASTAR(version4．02)中的 SeqMan程序包分析 IHH基因是 BDA1的致病基 因。IHH基因由3个外显 测序结果。发现的序列变异在 NCBI和 Hapmap的多 子组成 ，共编码411个氨基酸。IHH前体蛋 白在分泌 态数据库进行查询 ，确定是否为单核苷酸多态 (single 细胞 中进行 了 自裂解 ，形成 了一个 2OkD左右 的 nucleotidepolymorphism)。通过同时检测 7例患者及 7 IHH—N信号活性蛋白和一个26kD左右的IHH—C蛋 例正常亲属的相应序列，鉴定变异序列是否与疾病表 白，IHH—N执行 了 目前所有 已知 的生物 学功能。 型共分离。见表 1。 IHH—N在合成细胞中经过脂修饰被分泌出来，在一系 列的调控因素下形成梯度向靶细胞弥散，通过Hedge- 表 1 PCR扩增 IHH基因的引物 hog信号传递途径，IHH—N与靶细胞膜上的Patched 外显子 引物 序列(5一3) PCR产物 退火温度 长度(bp) (℃) (Ptc)受体结合，刺激软骨细胞的繁殖、分化和软骨形 成 J。自2001年以来，已陆续在 11个来 自不同种族 的BDA1家系 中检测到 10种不 同的 IHH基 因突 变 引，这些突变都位于IHH基因编码的IHH—N 信号活性蛋白区域内 。被影响的这些氨基酸在各种 生物种类中非常保守，提示这些高度保守的氨基酸可 能对 IHH的功能有非常重要的作用 。 本研究的广东汉族家系中，患者主要临床表现为 手足的所有中节指 (趾)骨缺失，末节指 (趾)骨短小， 2 结果 尺骨茎突缩短，确诊该家系短指为BDA1。系谱分析表 2．1 临床类型及遗传方式 家系中所有患者短指作 明，符合常染色体显性遗传的特点。为了明确该家系 为一种独立的异常存在 ，根据临床特征和x线检查结 短指 (趾)的致病原因，我们尝试对导致 BDA1的IHH 果 ，我们可确定该家系的短指属于BDA1。系谱分析显 基因的突变进行筛查。经过对 IHH基因3个外显子的 示该家系短指的遗传方式符合常染色体显性遗传。 突变分析，发现该家系7例患者均存在El31K错义突 2．2 IHH基因突变检测 利用所设计的引物对 IHH 变，患者的7例正常亲属未检测到此突变，与疾病存在 基因3个外显子及外显子／内含子接头序列进行 PCR 共分离，提示 I