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水杨酸处理对结球白菜幼苗生理活性影响【摘要】本试验通过对5叶期结球白菜幼苗喷洒不同浓度的水杨酸，研究SA诱导对结球白菜幼苗相关生理活性的影响。 【关键词】水杨酸；结球白菜；几丁质酶；诱导。 【 abstract 】 this test on 5 leaf stage “ball cabbage seedlings spray different concentration of salicylic acid, research on the ball induced SA cabbage seedlings physiological activity related to the effect. 【 keywords 】 salicylic acid; “The ball cabbage; Chitinase; Induction. 中图分类号：Q946.82+8.3文献标识码： A 文章编号： 水杨酸(又称邻羟基苯甲酸，salicylic acid，SA)是一种广泛存在于植物体内的小分子酚类物质,它与植物的开花、气孔的关闭、种子的萌发、光合、呼吸、蒸腾、膜的通透性等许多生理过程有关。大量的研究结果表明，它与植物的抗病性有关，是植物系统性诱导抗病性信号传递系统中的重要组成部分。本文就外源水杨酸对结球白菜生理活性的影响进行研究，为进一步研究水杨酸的作用机理提供理论依据。 .1、试验 本实验在室内采用营养钵播种育苗结球白菜，苗期进行正常管理。第5片真叶展平时，用喷雾器将浓度分别为1 mmol.L-1、2.5 mmol.L-1、5 mmol.L-1和7.5 mmol.L-1的水杨酸溶液和蒸馏水分别均匀喷于叶部，分别在处理后8 h、12 h、16 h、20 h提取粗酶液；同时用喷雾器将浓度分别为0.3 mmol.L-1、0.6mmol.L-1、0.9 mmol.L-1、1.2 mmol.L-1、1.5 mmol.L-1、1.8 mmol.L-1、2.0 mmol.L-1、2.5mmol.L-1的水杨酸溶液和蒸馏水分别均匀喷于第5片真叶展平时的叶部，在处理后12 h提取粗酶液。 （1）粗酶液的提取 首先是几丁质酶粗酶液的提取 水杨酸处理后，选取生长正常具有代表性的成熟叶片，洗净晾干，称取1克剪碎置研钵内，加入6ml的0.1 mmol.L-1柠檬酸钠缓冲液(pH5.0)，冰浴中，研磨,将溶液转移置7ml离心管，4℃冷冻离心(1000r/min，10min)，收集上清即得粗酶液。 其次是 SOD 、POD和CAT酶液的提取 第5片真叶展平时，用喷雾器将浓度分别为0.3 mmol.L-1、0.6mmol.L-1、0.9 mmol.L-1、1.2 mmol.L-1、1.5 mmol.L-1的水杨酸溶液和蒸馏水分别均匀喷于叶部，分别在处理后8 h、12 h、16 h、20 h提取粗酶液：称取 0.1g结球白菜幼苗叶片放入研钵中，取 5 mL1/15 mol 磷酸缓冲液( pH=7.8)倒入研钵内，冰研磨成匀浆，6000 r/min 离心20 min，倾出上清液，放入5 mL试管内，剩余物加少量缓冲液冲洗后，再次离心(6000r/min，5min)，取上清液，如此重复3次，直到酶粗提液补足 5 mL。将酶液放入4℃冰箱中保存备用。以上方法用于SOD 和CAT酶液的提取，而 POD 酶液的提取使用的是0.01mol/L磷酸缓冲液(pH=7.2)，其余方法同上。 （2） 酶活的测定 第一、几丁质酶活性的测定 几丁质酶活力的测定参照陈崇顺等的方法[19]，试验重复4次。胶体几丁质的制备参照Berger和Reynolds等方法[20]。取400μL胶体几丁质（10mg/ml），加1400μL（10 mmol.L-1）磷酸钠缓冲液（pH6.4）混匀，再加800μL粗酶液混匀，置37℃恒温水浴保温2h，然后置100℃煮沸3min，室温离心10min(2400r/min)。取上清液400μL，加20μL（1 mmol.L-1）磷酸钠缓冲液（pH7.1）和80μL的1%（W/V）蜗牛酶，将反应液置于37℃恒温水浴30min，以水解几丁质寡糖，最后按照Reissig等的比色法，测定所有N-乙酰氨基葡萄糖。以在上述条件下，每增加0.010光密度值的酶量为1个酶活力单位（U）。 第二、超氧化物歧化酶活性测定 SOD活性测定参照王爱国等【21】和韩雅珊【22】的方法。3mL反应液中含有：0.013 mol/L 甲硫氨酸、63×10-6 mol/L 氮蓝四唑、1.3×10-6 mol/L 核黄素、1×10-4mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)及 pH=7.8 的0.05