信号转导及转录活化因子3在肝癌细胞株及组织内的表达.pdfVIP

广东医学 2013年 5月 第34卷第 9期 GuangdongMedicalJournalMay．2013，Vo1．34，No．9 · 1347- 信号转导及转录活化因子 3在肝癌细胞株及 组织 内的表达术 宋涛，杨雪，郭成，姚英民，杨威，刘青光 西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科(西安710061) 【摘要】 目的 研究信号转导及转录活化因子3(STAT3)在肝癌细胞株及肝癌组织中的表达。方法 RT— PCR、Westernblot检测人肝癌细胞株 HepG2、Hep一3B、Bel一7402、SMMC7721及正常永生化人肝细胞L—O2细胞 内STAT3mRNA和蛋 白的表达；取肝癌组织标本 ，RT—PCR和免疫组化检测肝癌组织和癌旁组织内STAT3mRNA 转录水平以及STAT3蛋白表达。结果 所检测肝癌细胞株 中STAT3的转录水平均高于L一02，HepG2STAT3蛋 白表达显著高于L一02；肝癌组织中STAT3转录及蛋白表达水平均高于癌旁组织。结论 肝癌中存在 STAT3的 异常表达。 【关键词】 原发性肝癌；信号转导及转录活化因子3；RT—PCR；免疫组织化学 信号转导及转录活化因子3(signaltransducerand 公司。 activatoroftranscription，STAT3)调控 与细胞增殖 、分 1．4 万 法 化 、凋亡密切相关基 因表达，在多种肿瘤中异常表达， 1．4．1 细胞培养 细胞株于含 10％胎牛血清改 良型 抑制 STAT3表达可以抑制肿瘤增殖 ，但 STAT3与 RPMI1640培养基中，37℃、5％CO 及饱和湿度下CO： 肝癌治疗相关研究报道鲜见。本研究检测肝癌细胞株 孵育箱内培养，取对数生长期细胞。 HepG2、Hep一3B、Bel一7402、SMMC一7721及正常永生 1．4．2 RT—PCR检测细胞株及组织 STA，r3mRNA的 化人肝细胞 L一02细胞和人肝癌组织 内STAT3mRNA 转录 细胞株取指数生长期细胞 ；肝癌及癌旁组织液 转录和蛋白的表达，探讨 STAT3作为肝癌基 因治疗靶 氮 内保存过夜后匀浆离心。FASTAGEN—RNAfast200 点的物质基础是否存在。 试剂盒提取总RNA。STAT3上游引物：5，_GTCAGAT— 1 材料与方法 GCCAAATGC一3，下游 引物：5 一TGATGTACCCT· TCGTYC一3，扩增产物368bp。以B—actin基因表达 1．1 细胞株 人肝癌细胞株 HepG2、Hep一3B、Be1— 产物为内参照，B—actin上游引物：5一ATCGTGCGT- 7402、SMMC一7721及正常永生化人肝细胞 L一02细 GACA，rrAAGGAGAAG一3，下游引物：5 一AGGAAG- 胞由西安交通大学医学院分子实验中心提供。 GAAGGcTGGAAGAGTG一3，扩增产物 197bp。逆转 1．2 组织标本 组织标本均来 自2008年5月至2010 录(RT)条件为 37℃反应 15rain，85c=《反应 5S。PCR 年5月西安交通大学医学院第一附属医院手术患者，均 反应条件为94℃预变性 5min，94℃变性 30S，50oC退 患有乙型病毒性肝炎，经术后病理证实为肝细胞肝癌组 火30S，72c=《延伸 30S，扩增30个循环 ；最后 72℃延伸 织，共计 73例，其 中男 61例，女 12例，年龄 (48．7± 5min，PCR扩增产物取5p：L，2．0％琼脂糖凝胶电泳。 11．3)岁。取非坏死区肝癌组织及距肿瘤边缘 2C