辛二酰苯胺异羟肟酸对人乳腺癌细胞T47D抗癌作用的机制.pdfVIP

广东医学 2013年2月第 34卷第 3期 GuangdongMedicalJournalFeb．2013，Vo1．34，No．3 · 365 · 辛二酰苯胺异羟肟酸对人乳腺癌细胞 T47D 抗癌作用 的机制 朱晓萍 海南省海 口市琼山区人民医院药剂科(571100) 【摘要】 目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对乳腺癌细胞 T47D抗癌作用的分子机制。方法 将培 养好的T47D细胞使用sAHA处理后 ，评估不同浓度 (1、2…468、10x／mol／L)SAHA 以及不同处理时间对细胞生长 的影响。通过 RT—PCR和Westernblot检测评价 SAHA对 T47D细胞中p21 ”、p27 、cyclinD1、cyclinD2和胸 苷酸合成酶 (TS)表达的影响，最后通过流式细胞术检测考察 SAHA诱导细胞凋亡的情况。结果 SAHA对 T47D 细胞生长的抑制表现出剂量和时间依赖性，50％抑制剂量为 1．877p~mol／L。T47D细胞用1~mol／LSAHA处理 24 h后，p21 和 p27 表达均有所增加，且引起 cyclinD1转录水平下降和cyclinD2转录水平上升，SAHA作用后 可引起细胞周期停滞。SAHA处理后，Ts的转录受到明显抑制(P0．05)，仅为对照组 (不使用SAHA处理)水平 的38％。通过流式细胞仪检测发现，细胞凋亡比例随着处理时间逐渐增加 ，在48h与对照组 (7％)相比，达到了 17％(P0．05)。结论 SAHA可通过调节细胞周期蛋 白和凋亡蛋 白抑制T47D细胞生长，诱导细胞周期停滞 以 及 细胞 凋亡。 【关键词】 SAHA；T47D细胞；抗肿瘤 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来其 弓I物序列为 5一cGTI’TTcGACCCTGAGAGTcTc一3。 发病率呈明显上升的趋势。组蛋白去乙酰化酶 (his— CyclinD1上游 引物序列为 5 一AGCCATGGAACAC— tonedeacetylace，HDAC)抑制剂是一种新型抗肿瘤药 CAGCTC一3，下游 引物序 列为 5 一GCACCTCCAG— 物，研究 表明，它可以抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞 CATCCAGGT一3。CyclinD2上游 引物序列为 5 一 分化和促进凋亡，而对正常细胞几乎没有影响。然而 ， TAcIrrcAAGTGcGTGcAGAAGGAc一3，下游 弓I物序歹0 其抗肿瘤的分子机制并无明确结论。因此，2010年 3 为5 一TCCCACACICCAGTTGCGATCAT一3。胸苷酸 月至 2011年 9月本实验 主要针对辛二酰苯胺异羟肟 合成酶(thymidylatesynthase，TS)上游引物序列为5 酸(suberoylanilidehydroxamicacid，SAHA)对人乳腺癌 ITCTAATACGACTCACTATAGGGACAATI1ACTArJTAC— 细胞 T47D抗癌作用的分子机制进行研究，为其临床 AATTAcA一3，下游引物序列为 5 一ATAGCCGGT- 应用提供理论依据 。 GATGATGATGATGATGATGGC一3。PCR反应条件 ：扩 增曲线 ，95cc1min、95℃ 15S、60cc15S、72℃45S(收集 1 材料与方法 荧光)，共40个循环；熔解 曲线：95℃ 15S，60oC30S，以 1．1 细胞株 人乳腺癌细胞株T47D购 自上海瑞齐生 0．2S增高0．1℃的速度缓慢升温至95℃。仪器 自动收 物科技有限公司。 集荧光，生成标准曲线、扩增曲线及融解曲线 ，记录ct 1．2 细胞培养 T47D于培养瓶 中贴壁生长，用含 值，根据标准曲线计算每个样本的相对定量值。 10％胎牛血清 、100U／mL青霉素和链霉素 的 RPMI 1．5 Westernblot分析 培养