辛伐他汀纳米脂质体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．46 No．6 Dec．2014 ·883 · · 论 著 · 辛伐他汀纳米脂质体对骨髓问充质干细胞 成骨分化的影响 徐 璐 ，王 超 ，沈文文，祁 荣 (北京大学心血管研究所，分子心血管学教育部重点实验室，北京 100191) [摘 要]目的：通过对骨形成蛋 白-2(bonemorphogeneticprotein2，BMP一2)和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase， ALP)的表达进行测定，研究纳米脂质体剂型对辛伐他汀(simvastatin，SMV)在骨髓间充质干细胞 (bonemalTowstro— realcells，BMSC)形成骨过程中的促进作用。方法：采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSC。以SMV原料 药处理组作为对照组，分别设 SMV药物浓度 1p~mol／L和2ixmol／L为SMV低剂量组 (SMVlowdosagegroup，S1)和 SMV高剂量组(SMVhighdosagegroup，S2)；将辛伐他汀纳米脂质体 (simvastatinnano—liposomes，SMV—liposome)处理 组作为实验组，根据 SMV药物包载浓度 1Ixmol／L和2ixmol／L分别设为SMV—liposome低剂量组(SMV—liposomelow dosagergoup，SL1)和SMV—liposome高剂量组 (SMV—liposomehighdosagergoup，SL2)；此外，实验中所有涉及到不做 任何处理的组 ，都作为空白组(blank)。将SMV和 SMV—liposome分别与 BMSC共孵育48h后 ，用碱性磷酸酶比色 法测定其 ALP比活性，用碱性磷酸酯酶显色试剂盒 (BCIP／NBTalkalinephosphataseCOIoFdevelopmentkit，BCIP／NBT Kit)检测其ALP蛋白表达量 ，用WesternBlot检测其BMP-2蛋白的表达量。结果：细胞毒性实验结果显示，对照组 与实验组在与BMSC共孵育48h后 ，各组细胞生存率均高于84％，且组间差异无统计学差意义 (P0．05)。在给 药浓度相同时，实验组ALP比活性显著高于对照组，其中s1组和SL1组ALP比活性分别为0．27±1．11和0．21-4- 2．15(P0．001)，s2组和SL2组ALP比活性分别为0．63±1．64和0．72±2．88(P0．05)。ALPBCIP／NBT染色 结果表明，与对照组相比，实验组ALP染色更深 ，且组内呈现剂量依赖性。实验组 BMP一2蛋 白表达量显著高于对 照组。同时，ALP比活性、ALPBCIP／NBT染色及BMP一2蛋白表达结果表明，对照组和实验组内均呈现剂量依赖性 ， 即高剂量组结果优于低剂量组。结论：纳米脂质体剂型能显著提高SMV促进 BMSC的成骨分化作用。 [关键词]辛伐他汀；间充质干细胞；脂质体；骨形态发生蛋白质类；碱性磷酸酶 [中图分类号]R329．471 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2014)06-0883-06 doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2014．06．013 Effectsofsimvastatin nano—liposomeson osteogenicdifferentiation ofbonemarrow stromalcells xuLu，WANGChao，SHENWen—wen，QIRong (InstituteofCardiovascularSciences，PekingUniversity；KeyLaboratoryofMolecularCradiovascularSciences，Ministryof Education，Beijing100191，China) ABSTRACT Objective：Toinvestigatetheeffectsofliposomalformulationonsimvastatinnano．1iposomes (SMV—liposome)promotingtheosteogeniedifferentiationofmicebonemaFFo