银屑病模型小鼠肠道Th17细胞及相关细胞因子的研究.pdfVIP

广东医学 2016年7月第 37卷第 l3期 GuangdongMedicalJournal Ju1．2016，Vo1．37，No．13 · 1925 · 银屑病模型小鼠肠道 Thl7细胞及相关细胞因子的 研究术 胡文娟 ，闰玉红 ，陈海明 ，卢传坚 广州中医药大学第二临床医学院(广州510405)；广东省中医院皮肤科 (广州510120) 【摘要】 目的 探讨咪喹莫特诱导的银屑病模型小鼠肠道免疫功能情况。方法 25只雌性SPF级 C57BL／6 小鼠随机分为正常组和模型组，模型组每天予5％的咪喹莫特乳膏62．5mg外涂背部皮肤，连续5d，正常组未予 任何处理。对模型组小鼠进行皮损矫正后的银屑病皮损面积和严重程度 (PASI)评分及病理切片观察，流式细胞 术检测肠系膜淋巴结Thl7细胞表达情况，ELISA法检测肠黏膜细胞因子白细胞介素(IL)一17、IL一23、IL一6、肿 瘤坏死因子一 (TNF一仅)的含量。结果 模型组背部皮肤 出现典型的银屑病样皮疹改变；模型组脾脏指数较正 常组升高(P0．05)，肠黏膜IL一17、IL一23、IL一6、TNF一0l的含量明显高于正常组(P0．05)，肠系膜Thl7细胞 的表达也明显高于正常组(P0．01)。结论 咪喹莫特诱导的银屑病模型小鼠存在肠道免疫功能异常，提示肠道 免疫功能可能与银屑病的发病有关。 【关键词】 银屑病；咪喹莫特；细胞因子；Thl7 银屑病是一种 CD4T细胞介导的、多基因遗传相 司)。PermeabilizationWashBuffer(10×)、CellStaining 关的慢性炎症性皮肤病。目前银屑病发病机制尚不明 Buffer、PE／Cy7RatIgG1、PE／Cy7anti—mouseIL一17A、 确，多数人认为与T淋巴细胞免疫异常密切相关。辅 APCanti—mouseCD4、TruStain fcX (anti—mouse 助性T淋巴细胞 (Thl7)在银屑病发病过程 中发挥 了 CD16／32)、FOXP3Fix／PermBufferSet(Biolegend)；10％ 重要的调节作用 ，在银屑病患者的皮损区和外周血中 中性甲醛固定液(Leagene)，佛波酯、离子霉素、莫能菌素 均可见 Thl7细胞及相关细胞 因子表达 的升高 。 钠 (Liankebio)，PBS、RPMI1640、胎牛血清(Gibco)。 而肠道作为银屑病患者机体全身免疫系统的重要组成 1．3 实验仪器 OLYMPUS(XSZ—H)光学显微镜； 部分，参与其局部黏膜免疫反应的Thl7细胞和相关因 Vector5多功能免疫分析仪，美 国PE公司；流式细胞仪 子的变化情况 目前 尚鲜见详细报道。因此，2015年 12 (美国BDFACSCalibur)等。 月16—31日本研究通过观察咪喹莫特诱导的C57BL／6 1．4 方法和分组 C57BL／6小鼠随机分为银屑病模 小鼠银屑病模型肠系膜淋巴结Th17细胞及相关细胞因 型组 13只和正常组 12只，实验前两组小 鼠均刮除背 子白细胞介素(interleukin，IL)一17、IL一23、IL一6、肿瘤 部毛发，形成大约2am ×3cm大小的面积，模型组每 坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)一 的表达情况， 天予5％的咪喹莫特乳膏62．5mg外涂背部皮肤，正常 探讨肠道免疫在银屑病发病过程中免疫方面的作用。 组未予任何处理。连续抹药5d，于第6天结束造模 ， 1 材料与方法 10％水合氯醛麻醉过量处死后取材。 1．1 实验动物 C57BL,6小 鼠25只，SPF级，体重20～ 1．5 观察指标及方法 22g，雌性 ，动物许可证号44007200024551，由广东省医 1．5．1 小鼠银屑病样皮损观察 采用银屑病皮损面 学动物试验中心提供，实验动物于实验前适应性饲养 积和严重程度 (psoriasisareaandseverityindex，PASI) 1周。 评分 ，用数码照相 的方法每天记录，并依据矫正 PASI 1．2 试剂和药物 5％咪喹莫特乳膏 (生产批号 评分标准，给予小鼠皮损处红斑