液相色谱仪维护、保养-上海市药检所化学室.ppt

液相色谱仪结构组成 流动相 脱气机 泵 进样器 柱温箱 柱后衍生化装置 检测器 流动相试剂 有机相：光学纯或HPLC级 水：必须是新鲜的去离子水 其它试剂：分析纯或更高 注意：使用前均用相应的滤膜滤过（≤0.45μm） 溶剂使用注意点 滤膜 聚四氟乙烯膜-双相 尼龙66膜可过水和大多数有机溶剂 醋酸纤维素滤膜适用于水性溶液（尤其是蛋白质和蛋白质相关样品） 再生纤维素滤膜适用于水溶性生物样品和有机溶剂。 注意：1.水膜和有机滤膜千万不可混用！！！ 　　　2.分别滤过的水相与有机相的混合。 溶剂过滤器检查 溶剂过滤器清洗 垂熔玻璃滤器： 不锈钢烧结滤器：可用超声清洗 流动相脱气方式 1．低压脱气法 电磁搅拌水泵抽空，可同时加温或向溶剂吹氮。由于抽空和加温都会导致溶剂蒸发，对二元或多元洗脱液的组成会有影响，故此法适用于单一组成的洗脱液。 2．氦气脱气法 将氦气通过过滤器通入洗脱液中，在0.1MPa压力下，以约60ml/min流速保持10～15min，用氦气的小气泡将溶于溶剂中的空气带出。此法简单方便，适用于所有洗脱液，只是氦气较贵。 3．超声波脱气法 将洗脱液瓶置于超声波清洗槽中，以水为介质超声脱气。一般500m1溶液约需20～30min。此法方便，适于采用。 在线脱气应用细节 氦气脱气：氦气起始流速一般设置30～60ml/min，维持时间根据流动相体积来确定，分析时维持流速一般设置在5ml/min左右。 真空在线脱气：脱气机每个通道的流动相相对固定，这样可避免相互干扰。更换溶剂排液要充分，并且要注意脱气机最大流速。 真空脱气机工作原理 脱气机维护 溶剂过滤器清洗 溶剂更换 不用通道溶剂更换或封堵 排液时要根据脱气机类型选择流速、时间。 注意：由于大部分连接头和 芯子都是塑料的，拧紧时千万 不可太用力。 脱气机故障 脱气机故障原因判断 真空泵故障：短接真空泵进、出口管路 真空腔漏 连接密封性 溶剂 半透膜破裂 泵 分类：1.作用原理 　　　　2.输液方式 　　　　 应用：单元泵 　　　　多元泵：1.低压混合：比例阀 　　　　　　　　2.高压混合：混合器 液相色谱的溶剂输送系统 低压混合四元泵工作原理 低压混合四元泵结构 Agilent 1100泵结构 密封垫冲洗装置 密封垫冲洗应用 泵应用细节 使用的流动相要与泵的压缩因子配对。特别是用梯度混合时。 对四元泵比例阀来说,密度大的流动相放下方（常规是水相溶剂应放在下方,有机溶剂放在上方）。 二元或四元泵的冲程调小可获得较好的混合效果，但会影响密封垫寿命。 梯度或比例阀的准确性可测定。 泵维护 泵维护 不同用途时溶剂选择 液相泵后常用在线过滤器 带可更换滤芯的在线过滤器图例 泵维护 多通道梯度阀 进、出口单向阀清洗 出口过滤阀清洗或更换 Seal Wash的清洗及密封垫更换 泵密封垫更换 石英柱塞杆清洁、更换 维护信息 密封垫磨合 常见泵故障和诊断 多通道梯度阀漏 泵前出现气泡 压力不稳 泵不出流动相（松开purge阀） 进、出口单向阀漏或堵塞 压力高 泵压力不正常原因 溶剂过滤器阻塞 气泡 进、出口单向阀故障 密封垫或柱塞杆磨损 管路渗漏或堵塞 比例阀故障 压力传感器故障 比例阀混合盐浓度太高 进样器 手动进样器：1.垫塞进样 2.阀进样 自动进样器： 手动进样器操作原理 手动进样器操作原理 手动进样器 手动进样器：六通阀 进样顺序：INJ时插针，LOAD时注射，再加INJ时运行 排空管翘起高度要与针口平行 六通阀接口最好用Rheodyne专用接头，减少死体积 若用定量管来定量，则多进样（定量管体积1.5倍以上） 转子密封圈若漏，可先将三个定位螺丝拧紧5-10度（如无效再更换转子） 手动进样器维护 防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，。 手动进样器维护 手动进样器维护 手动进样器维护 转子密封垫选择 自动进样条件优化 进样污染处理 进样污染处理 自动进样器维护 进样座与针外壁要在诊断中的change needle状态下，用水棉球及异丙醇棉球擦洗。 若常用缓冲溶液，计量泵内的柱塞与密封圈，六通阀上的定子与转子密封圈要定期清洗。 若六通阀的转子密封圈有划痕，可将三个固定螺丝各拧紧5到10度。 机械部分要保持清洁，若有灰尘需取出机械臂，除尘并加稀牛油。 定量环要在Configure中定义，如100ul、500ul、900ul、1500ul。 自动进样器维护 更换针及针座 更换转子密封圈 自动进样器常见故障 柱温箱 连接头、