曲古菌素A和ATRA合用对PLZFRARα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用.doc

　　曲古菌素A和ATRA合用对PLZFRARα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用 　　【Abstract】 AIM: To investigate the effect of alltrans retinoic acid (ATRA) in biion ice oter to express in myeloid cells of mice. The genotype and phenotype munofluorescence, morphology of bone marroarroia cells orphology sa staining; cell cycle distribution and expression of cell membrane surface differentiationrelated antigens (such as CD11b, CD117 and Gr1) ined by floetry assay. Expression of PLZF munofluorescence. Functional differentiation (NBT) reduction ability. RESULTS:Some hCG PLZFRARα transgenic mice developed leukemia resembling human chronic myeloid leukemia. After treated arroia cells presented morphologically some features of differentiated cells; the cell groedependent manner. The proportion of cells in S phage ented ia, promyelocytic, acute 　　【摘要】 目的： 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)和ATRA对PLZFRARα转基因发病鼠骨髓细胞的作用. 方法： 分子克隆技术构建hCGPLZFRARα转基因构件. 显微注射建立仅在髓系细胞中表达PLZFRARα的转基因小鼠模型. DNAPCR，Southern blot，RTPCR，免疫荧光，血象，骨髓象，脾细胞形态，病理等检测分析基因整合表达及发病情况. 取PLZFRARα转基因发病鼠骨髓细胞体外培养，经TSA和ATRA作用一段时间后，LRARα融合基因，成为APL特征性的分子标志. 少数变异型APL患者携带t(11;17) (q23;q21)，表达PLZFRARα融合蛋白. PMLRARα和PLZFRARα两种融合基因的产物均能阻断维甲酸信号传导通路，但二者对全反式维甲酸(alltrans retinoic acid, ATRA)的反应却表现出明显不同，即表达PMLRARα的APL患者对ATRA敏感，而表达PLZFRARα的患者对ATRA不敏感. ATRA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACi）曲古菌素A(trichostatin A, TSA)联合治疗可以诱导PLZFRARα阳性APL细胞发生分化［1］. 我们利用建立的PLZFRARα融和基因在小鼠髓系细胞特异表达的hCG PLZFRARα转基因鼠(transgenic mice, TM)模型，在生物水平研究了TSA联合维甲酸对PLZFRARα 阳性白血病细胞的诱导分化作用. 　　1材料和方法 　　1.1材料TM的建立参照文献［2］. 本研究所已经构建了hCGPLZFRARα载体，将此质粒转化大肠杆菌，氨苄青霉素LB平板筛选出阳性克隆，获得的质粒经酶切及测序验证后，用Qiagene纯化柱大量提取质粒，经SalI, PvuI酶切完成质粒线形化，纯化得到转基因构件. 将转基因构件显微注射到受精卵雄原核，植入假孕母鼠，小鼠出生后2 a)溶解于无水乙醇， 配成1 g/L储存液, 用时以培养液稀释成10 mg/L工作液. ATRA (Sigma)溶解于无水乙醇, 配成10 mmol/L储存液, 用时以培养液稀释成100 μmol/L工作液. 　　1.2方法 　　1.2.1基因整合检测图1转基因鼠骨髓细胞PLZF表达(IF×400) （略） 　　2.2PLZFRARα TM发病表现 PLZFRARα转基因发病小鼠的症状类似于人类慢性粒细胞白血病(CML)，小鼠一般在出生后6~12 mo发病. PLZFRARα发病小鼠与同窝阴性鼠相比，明显消瘦、不活泼、弓背、翘毛、四肢苍白，皮肤黏膜有时破溃出血，不经治疗自然