槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC7721的研究.doc

　　槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC7721的研究 ：郭艳杰 周立社 孔凡青 张智燕 周成江 【摘要】 目的：探讨槲寄生生物碱对肝癌细胞株SMMC7721 P53基因表达的影响。方法：MTT法测定槲寄生生物碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用；半定量RT-PCR法测定抑癌基因P53 mRNA表达变化。结果：槲寄生生物碱作用后SMMC-7721细胞出现显著生长抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。RT-PCR检测SMMC-7721细胞中P53 mRNA表达的相对强度，发现0.100mg/mL的槲寄生生物碱作用于SMMC-7721细胞24小时后，P53 mRNA表达的相对强度增高(P＜0.01)。结论：槲寄生生物碱对抑癌基因P53表达的影响可能是其抑制肿瘤生长的分子基础。 【关键词】 槲寄生生物碱；P53；RT-PCR；人肝癌细胞株SMMC-7721 　　Abstract Objective：To examine the effects of mistletoe alkali on P53 expression in Human Hepatocarcinoma cell SMMC-7721. Methods:MTT assay istletoe alkali on the proliferation of human Hepatocarcinoma cell SMMC-7721. RT-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique RNA expression in human Hepatocarcinoma cell SMMC-7721. Results:Mistletoe alkali significantly inhibits the groe and dose-dependent manner. After exposure of SMMC-7721 cells istletoe alkali at 0.100mg/mL for 24 hours, the relative intensity of P53 mRNA expression level as determined by RT-PCR increases markedly (P＜0.01). Conclusion:The stimulation of the expression of anti-oncogene P53 by mistletoe alkali may underlie the molecular basis for it to inhibit tumor groan hepatocarcinoma cell line SMMC-7721 　　原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居恶性肿瘤的第二位[1]，且原发性肝癌具有起病隐匿、进展迅速、高度恶性、易转移复发、 治疗 难度大、生存期短等特点，被称为“癌中之王”[2]。目前肝癌以外科手术为首选治疗方案，但术后5年生存率并不理想，总体只有62.9%，大肝癌术后5年生存率仅34.6%。近年来应用传统的中药治疗日益受到重视。槲寄生为桑寄生科植物槲寄生［Viscum coloratum(Komar)Nakai］的干燥带叶茎枝，其味苦、平，归肝、肾经，有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎作用[3] ，且槲寄生有较好的抗肿瘤效果[4] 。本文从分子水平探讨槲寄生抑制肝癌的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞株 人肝癌细胞SMMC-7721，购于 中国 科学 院上海细胞研究所。 　　1.1.2 主要试剂和仪器 RPMI1640(GIBCO)，胎牛血清(杭州四季青公司)，二甲基亚砜、MTT(Amersco)，RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒（宝生物公司），琼脂糖（Promega），引物（上海生工）、Forma CO2培养箱（美国），ELX-800酶标仪（美国），Enpddorf低温离心机（德国），PCR仪(美国)，紫外分光光度计（日立），倒置显微镜、凝胶成像系统（上海康乐）。 　　1.1.3 药物 槲寄生购于包头益仁堂中药房，山西医科大学药学系扬官娥教授鉴定该中药为槲寄生并非其他寄生。槲寄生生物碱由本校化学教研室予以提取。将提取物以碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂检验呈阳性反应，证明提取物为槲寄生生物碱。 　　1.2 方法 　　1.2.1 体外细胞培养 细胞培养于含10%胎牛血清、100mg/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI1640培养基中, 37℃、5%CO2培养箱中培养,每2天换液1次。 　　1.2.2 MTT法测定槲寄生生物碱对肝癌细胞增殖的影响 取对数生长期的肝癌细胞调整