高考生物大一轮复习6蛋白质和DNA技术课件中图版选修1.pptVIP

第六章 蛋白质和DNA技术 【考纲考情】 无 无 T35·非 选择题 PCR技术的基本操作和应用 无 无 无 蛋白质的提取和分离 2012年 2013年 2014年 三年考情(以山东高考卷为例) 最新考纲及要求 【知识梳理】 考点一 血清蛋白的提取和分离? 1.方法及原理： (1)方法：电泳法。 (2)原理：①各种蛋白质分子带电性质的差异； ②分子本身大小、形状的不同。 2.实验操作程序： (1)点样：用微量加样器取新制血清，小心加到电泳样品槽的胶面上。 (2)电泳：打开并调节稳压稳流电泳仪进行电泳。 (3)染色：用质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液对凝胶进行染色。 (4)脱色：用体积分数为7%的醋酸溶液脱色。 (5)制干胶板：保存液浸泡凝胶板后，放在两层透气玻璃纸中间自然干燥。 【高考警示】 (1)电泳时，带电的颗粒向与其电性相反的电极方向移动。 (2)电泳时，蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，分子量越小，则移动越快。 考点二 DNA片段的扩增? 1.细胞内DNA复制与PCR技术的比较： 严格控制温度变化的温控设备 无 需要人为控制 不需要 30多次 受生物体自身控制 体外迅速扩增 边解旋边复制，半保留复制 无转录，需加入两种引物 伴有转录，产生引物 耐高温的TaqDNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶 不需ATP提供能量 ATP提供能量 设备 缓冲液 循环次数 特点 是否有转录 酶 能量 细胞外 细胞内 场所 不 同 点 PCR扩增 DNA复制 项目 都需要与模板相结合的引物 DNA为模板 严格遵循碱基互补配对原则 引物 模板 复制原理 四种脱氧核苷酸 原料 相 同 点 PCR扩增 DNA复制 项目 2.PCR技术反应过程中控制不同温度的意义： (1)95℃变性，双链DNA解旋为单链。 (2)55℃复性，引物与两条单链DNA结合。 (3)72℃延伸，耐高温的DNA聚合酶有最大活性，使DNA新链由5′端向3′端延伸。 【高考警示】 PCR技术的一个循环包括高温变性、低温复性和中温延伸三个步骤；每一循环中DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数增长。 类型一 蛋白质的提取和分离 【典例1】(2015·济南模拟)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离回答问题： (1)凝胶色谱法的基本原理是根据_____________________________ 分离蛋白质的有效方法。 (2)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤次数过少，无法除去 ________；离心速度过高和时间过长会使____________等一同沉 淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是___________________ _________。释放血红蛋白的过程中起作用的是_______________。 (3)洗脱的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体________(填“相同” 或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速要求是_______________。 (4)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH 为7.0)的目的是____________________________，如果红色区带 ________________________________，说明色谱柱制作成功。 【解题指南】(1)关键词：“洗涤红细胞”“离心速度”“释放血红蛋白”。 (2)隐含信息：红色区带为血红蛋白。 【解析】(1)凝胶色谱法是根据蛋白质的相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。 (2)洗涤红细胞的目的是去除血浆蛋白等杂蛋白，如果洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是离心后的上清液中没有黄色。释放血红蛋白的过程中起作用的是蒸馏水和甲苯，其中蒸馏水的作用是使红细胞吸水破裂，甲苯可溶解细胞膜，加入甲苯能加速红细胞破裂并释放血红蛋白。 (3)洗脱的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体相同，否则会影响洗脱液的pH，使蛋白质的结构受到破坏。洗脱时，洗脱液的流速要保持稳定，否则将影响蛋白质的分离效果。 (4)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致，进而保持蛋白质的正常形态结构；洗脱时，血红蛋白的颜色可以指示血红蛋白的位置，因此当红色区带均匀一致地移动时，说明色谱柱制作成功。 答案：(1)相对分子质量的大小 (2)杂蛋白(血浆蛋白)　血浆蛋白　白细胞　离心后的上清液中没有黄色　蒸馏水和甲苯 (3)相同　保持稳定 (4)准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内