LAMP与FQ—PCR技术检测HBVDNA的特异性和灵敏度比较.pdfVIP

成都医学院学报2013年第8卷第5期 JournalofChengduMedi eg!， !!!：! ． 网络出版地址 ：http：／www．cnki．net／kcms／detail／51．1705．R0757．001．html doi：10．3969／j．issn．1674—2257．2013．05．005 · 检验与临床专题 · LAMP与 FQ—PCR技术检测 HBVDNA的 特异性和灵敏度 比较 邓正华，晏丽 ，黄远 帅，彭瑛 ，温先勇 (泸州 医学 院附属 医院检验科 ，泸州 646000) 【摘要】 目的 采用环介导等温扩增反应 (1oop—mediatedisothermalamplification，LAMP)技术与实时荧光定 量 PCR(real—timefluorescentquantitativePCR，FQ—PCR)技术检测 HBVDNA，并对 LAMP方法 的反应条件进行优 化 ，比较两种方法检测 HBVDNA的灵敏度及特异性 。方法 选取经医院确诊 的乙肝患者 的血清 ，提取血清 中的 HBVDNA作为扩增模板 ，同时对 LAMP方法 的各种条件进行优化 ，并分别采用 LAMP和 FQPCR两种方法对同 一 HBVDNA模板做 1O倍梯度稀释 的标本进行 HBVDNA 的检测 ，比较其灵敏度 ；分别用两种方法对乳头瘤病毒 (HPV)、EB病毒、大肠埃希 氏菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌 以及正常人血清基 因组 DNA在 相 同条件下进行实验 ，观察两种方法在检测 中是否 出现假 阳性结果 ，以确定两种方法 的特异性 。结果 对 同一 HBVDNA模板进行 1O倍梯度稀释后 ，FQ-PCR技术在待测血清标本(2．38×10 copy／mI)被稀释到 lO ，就难 以 进行准确检测 ，而 LAMP方法在待测血清标本被稀释到 1O。时，仍能获得较好 的扩增结果 ；对 HPV、EB病毒、大肠 埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌以及正常人血清基因组 DNA进行 LAMP和 FQ-PCR检 测 ，结果均为阴性 。结论 采用 LAMP方法可 以成功、快速、高效 、特异地扩增 HBVDNA，与 FQ-PCR方法 比较 ， 都能特异地检测 HBVDNA，但 LAMP方法具有更高的灵敏性，操作更为简单、方便 ，且不需要 昂贵的仪器 ，更适合 基层检测机构推广使用 。 【关键词1 LAMP；FQ_PCR；HBVDNA；特异性 ；灵敏度 【中图分类号1 R446．5 【文献标志码】 A ComparisonofSpecificityandSensitivityforHBV DNA DetectionBetweenLAMP andFQ-PCR Method DENG Zheng—hua，WAN Li。HUANGYuanshuai，PENGWing，WEN Xianyong (LaboratoryMedicineDepartmentoJ At}iliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege，Luzhou646000，China) [Abstract1 Objective The LAMP (Loop—mediated isothermalamplification) and FQ_PCR (real—time fluorescentquantitativePCR)wereused todetectHBV DNA．TooptimizeLAMP reaction，andthencomparethe sensitivityandspecificityofthetwotechniques．M ethods HBV DNA wasextractedfrom serum ofpatientsinour hospitalandIAMPreactionconditionwasoptimize