PKC信号介导CGRP表达调控内脏高敏感性探讨安肠汤防治腹泻型肠易激综合征.pdfVIP

2438 实用医学杂志2016年第 32卷第 l5 PKC信号介导CGRP表达调控内脏高敏感性 探讨安肠汤防治腹泻型肠易激综合征 黄适 刘鹏 张涛 林春李 平倩 摘要 目的：基于治疗前、后腹泻型肠易激综合征 (diarrheapredominateirritablebowelsyndrome，D—IBS) 大鼠内脏敏感性 、结肠蛋 白激酶 C(PKC)、降钙素基 因相关肽 (CGRP)表达 ，探讨安肠汤治疗D-IBS的机制。 方法：90只清洁级雄性 sD大鼠随机分为6组，每组 15只，设为正常组、模型组、对照组、治疗组(低、中、高 剂量)除正常组外，余大鼠采用0．25％辣素制剂灌 胃+束缚应激 2周法造模后，正常组同步饲养，模型组予 生理盐水．治疗组和对照组分别予不同剂量的安肠汤煎剂及得舒特片混悬液2周，末次给药后处死全部大 鼠取结肠并用HE染色法进行病理学检测；用PCR、Western—blot技术检测结肠 PKC、CGRP表达 ；应用腹壁 反射评估大鼠内脏敏感性 结果：光镜下大鼠结肠符合 IBS病理表现。根据腹壁反射试验的阈值 比较，模型 组比正常组明显下降．治疗组比模型组明显上升(P0．05)。模型组PKC、CGRP表达较正常组呈明显上升 (P0．05)；治疗组PKC、CGRP表达较模型组明显下降(P0．05)。结论：安肠汤具有缓解D-IBS的效用，其 机制可能与下调 PKC、CGRP表达，降低 内脏高敏性相关。 关键词 辣素： 肠易激综合征 ； 安肠汤； 蛋白激酶C； 降钙素基 因相关肽 肠易激综合征 (irritablebowelsyndrome，IBS) 1．2 试剂 HE染色相关试剂购 自广西博仁生物 发病机制不 明。但是 内脏高敏感性 (visceral 科技有限公司，Eppendorf管购 自美国AEGEN公 hyperalgesia，VHL)被认为是研究 IBS以及临床一基 司。PKC、CGRP一抗产 自abeam公司 (批号分别 础转化的一个重要切入点[2-3]。研究…发现蛋 白激 为 ：ab32122、ab47027)、antiGAPDH多克隆IgG抗 酶 (PKC)作为重要的蛋 白激酶 ，PKC。TRPV1一CGRP 体产 自GOODHERE公司(批号：AB．P．R001)，Goat 通路参与痛觉传导，以此为靶点有助于我们深入 anti—rabbitIgG．HRP二抗产 自SANTA CRUZ公 司 了解 VHL的可能机制和效应靶点。本课题组在中 (批号 ：SC一2004)，BeyoECLPlus(超敏ECL化学发 医基础理论指导下 ，总结经验用方安肠汤。临床证 光试剂盒)购 自上海碧云天生物技术有限公司， 实该方对 IBS．D疗效确切l5-，但效用靶点不明。因 DEPC．H20、荧光定量 PCR试剂 、Oligod(T)Primer、 此，本课题组基于前期研究进展 ，观察安肠汤对 RandomPrimer产 自广州英伟创津公司。辣椒素由 IBS结肠 PKC、降钙素基因相关肽 (CGRP)表达及 东京化成工业株式会社生产 (批号为：206969．8)， 对内脏敏感性的影响，探讨其治疗 IBS．D可能作 将辣椒素加入 75％酒精中，制备成浓度为0．25％ 用机制及效用靶点。 的溶液，4℃储存备用 1．3 仪器 Mini型蛋 白电泳系统 (Bio．rad)，脱色 1 材料与方法 摇床 TY一80A／S(金坛市希望科研仪器有限公司)， 1．1 实验动物 sD大鼠90只，SPF级雄性 。体重 数码凝胶图像分析系统 1600 (上海天能科技有限 (180-4-20)g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公 公司)，X射线摄影暗匣AX—II(