PPI1对人宫颈癌HeLa细胞紫杉醇敏感性的影响.pdfVIP

／ + 、 ． - V01．39 No．4 P．489 第 39卷第 4期第 489页 华 中科技大学学报 (医学版) 2010年 8月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Aug． 2010 一实 一 一＼；究●。，一． ～ PPI1对人宫颈癌 HeLa细胞紫杉醇 敏感性的影响* 曾麒燕 ， 曾麟杰 ， 黄勇奇 ， 贺菽嘉 ， 张 红 广西医科大学生物化学与分子生物学教研室 ，南宁 530021 。广西贵港市骨科 医院骨一 区，贵港 537100 摘要 ：目的 探讨 PPI1野生型和活化型突变体 的表达对宫颈癌细胞株紫杉醇敏感性的影响 。方法 建立 PPI1野 生型和持续活化型突变体稳定表达的HeLa细胞株 ，用 MTT实验 、克隆形成实验 、流式细胞术等方法观察转染 PPI1的 HeIa细胞对化疗药紫杉醇的敏感性，通过 Westernblot分析凋亡相关蛋 白的表达及 MAPK信号转导通路的活化情况 。 结果 经紫杉醇处理后 ，PPI1持续活化型突变体 的表达 明显抑制 HeLa细胞的增殖和克隆形成能力；该组细胞凋亡率及 Gz／M期细胞所 占比例明显升高；Westernblot分析表明，该组细胞促凋亡分子 Bax的表达 、Caspaes一3和 Caspaes一8的活 化及 Bcl2和 p38的磷酸化程度 明显增强 。结论 PPI1持续活化型突变体的表达可明显增强 HeIa细胞对紫杉醇 的敏 感性，其中涉及到Bax表达和 Bcl一2磷酸化增强，Caspaes一3、Caspaes一8的活化增强和 p38信号转导通路的活化增强。 关键词 ：I型磷酸酶抑制亚基一l； 紫杉醇； 细胞凋亡 ； 细胞周期 ； 信号转导 中图分类号 ：R349．5 DOI：10．3870／j．issn2O10．04．014 EffectofPPI1onSensitivityofHumanCervixCarcinomaCellLineHeLatoTaxol ZengQiyan ，ZengIAnjie，HuangYongqietal DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China 2TheFirstDepartmentofOrthopedics，GuigangOrthopedicHospital，Guigang537100，China Abstract Objective TostudytheeffectsofPPI1geneonthesensitivityofhumancervixcarcinomacelllineHeLatotaxol andthepossiblemechanism．Methods PlasmidscontainingwildtypeoractivatedmutantofPPI1geneweretransfectedintohu— mancervixcarcinomacel1lineHe1a．G418wasusedtoselectthecellclonesconstantlyexpressingPP11protein(HeLa-PP11／ Wt，HeLa—PPI1／sI1)．TheexpressionofPP11／wtfusionproteinandPPI1／sllwasconfirmedbyRT—PCRorWesternblot．The sensitivityofcellstotaxolwasexaminedbyusingMTT assay，colonyformationassay．andflow cytometry．Immunoblottingwas usedtodeterm