RelB基因沉默的髓源树突状细胞负载Tα146-162对TAChR预致敏T细胞免疫反应的影响.pdfVIP

中南大学学报 ‘学版 vfMedSci)、 2…01uo，3～5(1)， h眦nPp‘_：，／／xbyx．。xyysm儿．n‘et‘ JCem SouthUni RelB基 因沉默的髓源树突状细胞负载 TeLl46l62 对TAChR预致敏 T细胞免疫反应的影响 张勇，杨欢，肖渡，鲁特飞 (中南大学湘雅医院神经 内科 ，长 沙 410008) 【摘要】 目的：探讨 坍基 因沉默的髓源树 突状细胞 (BMDC)负载 电鳗 乙酰胆碱 受体 (TAChR)优 势肽段 T0。【46～l62在 TAChR预致敏 C57BL／6小鼠中能否诱导免疫耐受。方法 ：制备产生 RelBsiRNA分子 的重组慢病毒和对照病毒 。慢病毒感染 BMDC后 ，给予 LPS刺激 ，相应 的DC命名为 DC—siRelB和 DC— control。应用实时定量PCR和Western印迹分析细胞 中RelB表达 ，流式细胞仪检测细胞表 型，ELISA检测 上清 白细胞介素 (IL)一12水平。36只C57BL／6小鼠随机分为 Al，A2，A3，Kl，K2，K3共6组。实验前 1天，A1一A3组用 TAChR+完全福氏佐剂 (CFA)致敏 ；K1～K3组用钥孔戚血清蛋 白(KLH)+CFA致 敏。第 7天，A2和 K2组 注射 T I46一l62脉冲的 DC-siRelB；A3和 K3组注射 T仅146 2脉 冲的 DC—control；A1 和 K1组给 予PBS。第l4天，H-TdR掺入 法检测淋 巴细胞增 殖反应。结果 ：成功构建 了含 成 基 因 的重组慢病毒 ，ReB／siRNA 可显著下调 DC 中RelB 的表达。与 DC—control相 比，DC—siRelB 中CD80， CD86，MHCII表达及 IL-12水平显著降低 。与 A1和 A3组相 比，A2组 TAChR刺激 下淋 巴细胞增殖反应 显著降低 (P0．05)，ConA和KLH刺 激下淋 巴细胞增 殖反应 差异无 统计 学意义 (P0．05)。Kl，K2 和 K3组在 KLH刺激下淋 巴细胞增殖反应差异均无统计学意义 (P0．05)。结论 ：慢病毒介 导的 RelB 基 因沉默的 BMDC可抵制成熟诱 导反 应并能在 TAChR预 致敏 的 C57BL／6小鼠中诱导抗 原特异性免疫 耐 受，为研 究其 用于治疗重症肌无力奠定 了基础 。 [关键词] 树 突状细胞 ； RelB； RNA干扰 ； 慢病毒载体 ； 重症肌无力 DOI：l0．3969／j．issn．1672．7347．2010．01．006 EffectofRelB—silencedB加 C pulsed 、vithT 46 ～ 162 on immunoreaction ofT cellsprimed with TAChR ZHANG Yong，YANG Huan，XIAO Bo，LU Tefei (DepartmentofNeurology，XiangyaHosptial，CentralSouthUniversity，Changsha410008，China) Abstract： Objective ToinvestigatewhetherRelB-silencedbonemarrow—deriveddendritic cells(BMDC)pulsedwith torpedoacetylcholinereceptor (TAChR) immuno-dominantpeptide Totl46 162can induce