SIAH2在鼻咽癌及癌旁组织中的表达及意义.pdfVIP

广东医学 2012年11月 第33卷第 21期 GuangdongMedicalJournalNov．2012，Vo1．33，No．21 · 3267 · SIAH2在鼻咽癌及癌旁组织中的表达及意义 吴珏茔，唐勇，刘威 中山大学附属第三医院甲状腺乳腺外科(广州510630) 【摘要】 目的 观察人鼻咽癌及癌旁组织中SIAH2表达的变化，探讨SIAH2在鼻咽癌及癌旁组织中差异表 达的临床意义。方法 应用免疫组织化学检测 120例鼻咽癌及癌旁石蜡包埋组织中SIAH2的表达情况，Western blot检测4O例鼻咽癌及癌旁组织中SIAH2的蛋白表达情况，RealtimePCR检测上述标本 中SIAH2mRNA的表达 并比较3种方法检测结果的差异。结果 鼻咽癌组织中SIAI-I2蛋白表达量明显高于癌旁正常鼻咽组织中SIAH2 蛋白表达量 (P0．05)；鼻咽癌组织中SIAH2mRNA表达量明显高于癌旁鼻咽组织中SIAH2mRNA蛋 白表达量 (P0．05)。结论 SIAH2过表达与鼻咽癌的发生发展有密切关系。通过将SIAH2作为靶点可为防控鼻咽癌的 发生和发展提供新的思路 。 【关键词】 SIAH2；鼻咽癌；癌旁组织 鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma，NPC)的发病与 实验，另一份放入 RNAlater后立即置于液氮快速冷冻 爱波斯坦 一巴尔病毒 (Epstein—BarrVirus，EBV)感染 、 冻存用于RealtimePCR实验。 遗传因素以及环境因素密切相关 。尽管以调强放射 1．2 试剂 鼠抗人 SIAH2单克隆抗体 ，购于 Santa 治疗技术为主的放化疗综合治疗使得 NPC的局控率 Cruz公司。免疫组织化学试剂盒和 DAB酶底物显色 有明显提高 ，但 NPC起病隐匿，转移早 ，易复发，5年生 试剂盒购 自北京中杉金桥生物技术有限公司。兔抗人 存率仍维持在70％左右 ，因此全面解析 NPC的病因 多克隆抗 B—actin抗体，羊抗兔及兔抗 鼠二抗 (West— 及其癌变的分子机制对于NPC的早期发现和患者生 erRblotting用)购于北京中杉金桥生物技术有限公司。 存率 的提高具有重要意义。SIAH(seveninabsentia realtimePCR用Trizol试剂盒购 白天根公司。 homologues)为果蝇 sina(seveninabsentia)基因产物的 1．3 方法 类似物，因其拥有 E3泛素连接酶活性 ，可介导多种蛋 1．3．1 SIAH2免疫组化检测 PowerVision 二步法 白经泛素连接酶体途径降解 。SIAH分为两个亚型， 免疫组化检测 SIAH2在 NPC与癌旁组织中的差异表 即SIAH1和SIAH2。大量研究结果显示，SIAH2可通 达：石蜡切片梯度脱蜡水化后 ，用3％的HO封闭内源 过泛素化降解多种 目的蛋 白，从而影响多条与肿瘤相 性过氧化物酶，之后PBS(0．01mol／L，pH=7．4)漂洗 关的信号转导通路，促进肿瘤发生和发展。已有学者 3次，每次 15min。3％山羊血清室温封闭45min后加 报道，应用SIAH2的抑制物 (如维生素 K)可有效抑制 入鼠抗人SIAH2单克隆抗体 (1：200)4cI=过夜 ，阴性对 黑色素瘤生长 。然而其在 NPC中的作用 国内外却 照组加PBS。第 2天 PBS漂洗掉未结合的一抗 ，加入 鲜有报道，本研究通过免疫组织化学和 Westernblot检 辣根过氧化物酶标记的二抗，室温孵育 1h，PBS再洗 测 SIAH2在 NPC及癌旁组织 中的表达情况 ，并通过 3次 ，用DAB进行显色，苏木素复染，中性树胶封片，然 RealtimePCR检测 SIAH2的mRNA在 NPC及癌旁组 后显微镜下观察结果。 织中的表达，分析SIAH2在不同组织中的表达差异及 阳性判定：SIAH2阳性表达于细胞核，以棕黄色颗 临床意义。 粒染色为阳性。每张切片在光学显微镜下随机选取 5 1 资料与方法 个高倍视野，每视野