siRNA 对人脐静脉内皮细胞中人剪切修复基因表达和凋亡的影响.pdfVIP

广东医学 2014年 9月 第35卷第 18期 GuangdongMedicalJournal Sep．2014，Vo1．35，No．18 · 2817 · siRNA对人脐静脉内皮细胞中人剪切修复基因 表达和凋亡的影响米 俞菊梅，孙国芳，李菊香 ，洪葵，程晓曙 南昌大学第二附属医院心 内科(南昌330006) 【摘要】 目的 向人脐静脉 内皮细胞(HUVEC)中导入靶向人剪切修复基因D干扰序列(XPD—siRNA)，观 察其对HUVEC的XPD基 因表达和凋亡的影响。方法 以XPD为靶基因，构建3个特异性 siRNA重组质粒，经转 染后观察其对HUVEC中XPD的沉默作用；并转染沉默效率最佳的 siRNA，观察其对细胞凋亡的影响。结果 Westernblot和 RT—PCR结果显示，与阴性对照组相 比，3个重组质粒 XPD—siRNA 的转染均能降低 HUVEC中 XPD的表达 (P0．01)，其 中XPD—siRNA一2的沉默效率最高(P0．01)。流式细胞仪结果显示，与阴性对照组 相 比，XPD—siRNA一2组能降低 HUVEC凋亡率(P0．01)。Westernblot结果显示，与阴性对照组相 比，转染XPD— siRNA一2能下调Bax(P0．01)和上调Bcl一2(P0．01)的表达。结论 XPD—siRNA转染能有效沉默HUVEC中 XPD基 因的表达。所筛选沉默效率最佳的XPD—siRNA能抑制HUVEC凋亡，而Bax和Bcl一2可能参与了此过程。 【关键词 】 干扰序列；人剪切修复基因XPD；人脐静脉 内皮细胞；转染 TheeffectsofsiRNAonXPDgeneexpressionandapoptosisofHUVECs． YUJu—mei，SUNGuo一／ng，LIJu— xiang，HONGKui，CHENGXiao—shu．DepartmentofCardiology，theSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity， Nanchang330006，China Correspondingauthor：LIJu—xiang，E—mail：ljx912@126．corn A【bstract】 Objective TostudytheeffectsonXPDgeneexpressionandapoptosisofhumanumbilicalveinendo· thelialcells(HUVECs)oftransfeetingsmallinterferingRNAofxerodermapigmentosumD．Methods Threespecificre— combinantplasmidsofXPD wereconstructedandidentified．ThesilencingeffectsofXPDsinHUVCEswereassessedafter siRNA transfeetion，andthesiRNA withthebestsilenceefficiencywasselectedamongthese3plasmids．Results West— ernblotandRT—PCR resultsshowedthat，comparedwiththecontrolgroup，thetransfectionofallthreerecombinant plasmidsofXPD—siRNAssignificantlyinhibitedtheexpressionsofXPD (P0．01)．AmongthesesiRNAs，XPD—siR— NA一2showedthebestsilenceefficiency(P0．01)．Floweytometryshowedthat，comparedwithcontrolgroup，the XPD—siRNA一2significantlyreducedHUVCEapoptosisrate(P0．01)．Westernblotresuhsshowedthat，compared withcontrolgroup，transfectionofXPD—siRNA一2significantlydown—regulatedtheexpressionofBax(P0．01)and up—regulatedtheexpressionofBcl一2．Conclusion ThesefindingsprovethattheexpressionsofXPD inHUVCEscan beeffectivelyi