神索葡萄自然发酵酵母菌群研究.pdfVIP

第29卷第4期 华中农业大学学报 V01．29No．4 2010年8月 of Journal HuazhongAgricuhuralUniversity Au吕2010。513～517 神索葡萄自然发酵酵母菌群研究★ 宋育阳1 白稳红2 刘延琳¨’ 1．西北农林科技大学葡萄酒学院／陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心，杨凌712100； 2．宁夏御马葡萄酒有限公司，青铜峡751600 摘要利用wL营养琼脂培养基，对宁夏御马葡萄酒厂的神索葡萄自然发酵过程中不同阶段分离得到的 105株葡萄酒相关酵母进行初步鉴定和聚类，进而对代表性菌株进行26SrDNAD1／D2区的序列分析。结果表 明：供试酵母菌株经分类鉴定应归人4属5种，分别是葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniasporauzlarllm、毕赤克鲁维 酵母Pichiakluyveri、假丝酵母Candida cerexrisiae和巴氏酵母Saccharo— zemplinin、酿酒酵母Saccharomyces myces 中期和后期的数量分别占各发酵阶段菌株总数的24．7％、3．9％和o％，呈动态减少趋势。 关键词神索葡萄；自然发酵；酵母菌；WL营养琼脂培养基；序列分析 中图分类号TS262．6 文献标识码A 文章编号1000-2421(2010)04-0513-05 宁夏贺兰山东麓地区是我国优质酿酒葡萄生态 变性，保守性反映生物物种的亲缘关系，而高变性则 区之一，该地区的葡萄酒被批准为原产地保护产品。 揭示生物物种的特征核酸序列。26SrRNA是核糖 研究该地区葡萄自然发酵过程中的酵母菌群，可以 体RNA的一个亚基，而26SrDNA是编码该亚基 7 为筛选适合该产区的优良酿酒酵母菌种及生产地域 的基因，26SrDNA的D1／D2区域位于大亚基的5 特色的葡萄酒奠定基础。传统的酵母菌鉴定主要依 端，序列长度在600 bp左右[5|，目前这一区域序列 据其形态特征和生理特征，但这些特征容易受到培 在酵母菌分类研究中的应用最为广泛。 养条件等因素的影响而出现不确定的结果，工作量 笔者利用WL营养琼脂培养基对宁夏御马葡 大而且耗时[1]。为快速简便地监测发酵过程中的微萄酒厂的神索葡萄自然发酵过程中不同阶段分离的 生物种类变化，Christina等[2]设计了一种观测酿造酵母进行分类，并对不同阶段分离的酵母菌的动态 和工业发酵过程中微生物种群的非选择型培养 变化进行分析；在WL营养琼脂培养基聚类分析的 基——WL营养琼脂培养基(Wallersteinlaboratory基础上用26SrDNA的D1／D2区的序列分析法对 nutrient agar)，可用来区分和鉴定一些常见的葡萄所具有代表性的7株酵母菌进行测序鉴定，确定 酒相关酵母。研究表明，葡萄酒自然发酵过程中出 其分类学地位，揭示分离菌株的多样性，为我国本 现的大多数典型的酵母菌都可以用wI。培养基。土优良葡萄酒酵母的选育提供种质资源和理论依 根据菌落的颜色及形态对酵母菌株进行区分和归 据。 类㈣]，其鉴定结果与分子方法的鉴定结果基本一 1材料与方法 致。 在分子研究领域，随着DNA序列分析技术的1．1供试材料 日趋成熟和简易化，rDNA的序列分析被应用于酵 1)菌株。宁夏御马葡萄酒厂神索葡萄品种自然 母菌的分类学研究中。rRNA结构具有保守性和高发酵过程中分离的酵母菌株(共105株)，其中发酵 收稿日期：2009—10-13；修同日期：2010-03—26 *国家葡萄产业技术体系建设专项经费(nycytx-30)资助 **通讯作者．E—mail：lylsun(孕yahoo．con-1．crI