携带人IL-10基因的腺病毒载体的构建及其对大鼠肝细胞损伤的保护作用.pdfVIP

JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) Ju1． 2013 Vo1．48 No．4 · 477 · doi：10．3969／j．issn．1671—6825．2013．04．012 携带人 IL．10基 因的腺病毒载体 的构建及其对大 鼠肝细胞损 伤的保护作用 程 剑△，沈晓洁，刘 艳 无锡卫生高等职业技术学校病理学教研室 无锡 214028 △女，1967年 10月生 ，硕士，副教授 ，研究方 向：病毒与基 因治疗 ，E—mail：251810058@qq．corn 关键词 白细胞介素一10；腺病毒载体 ；大 鼠；肝细胞 ；保护作用 中图分类号 R657．3；R575 摘要 目的：构建携带人 自细胞介素一10(hIL一10)基 因的腺病毒载体 ，并验证其对大 鼠肝细胞损伤 的保护 作用 。方法 ：以 pORF—hIL一10质粒为模板 ，PCR扩增 hIL一10，插 入腺病 毒质粒 pDC315，构建 pDC315一hlL一10。 将 pDC315一hlL一10质粒与腺病毒包装质粒共转染 293细胞 ，产生复制缺陷型重组腺病毒 Ad5一hlL一10；感染大 鼠肝细胞 ，免疫学方法鉴定 目的基 因的表达 ；建立 CCL 诱导的大 鼠肝细胞损伤模型，观察 Ad5-hlL-10不 同感 染强度 (MOI)预处理对损伤肝细胞存活率 的影 响 。结果 ：经 PCR扩增 ，证 明已正确构建重组腺病毒 Ad5一hIL一 10。大 鼠肝细胞感染 Ad5一hIL一10后 ，随着病毒 MOI的升高 ，hIL-10表达上升 (F=52．667，P0．001)。不 同 感染强度 (MOI=1、5、10和 50)Ad5一hIL10预处理组大 鼠肝细胞存活率较损伤对照组升高，差异有统计学意 义 (F=23．645、22．533、30．697、35．559，P均 0．001)。结论 ：成功构建 了重组腺病毒 Ad5·hlL一10，其能提 高肝细胞 的存活能力，对肝细胞有保护作用 。 Constructionofadenovirusvectorcarryinghumaninterleukin一10geneand itsprotectioneffectsonrathepatocytesduringliverinjury CHENGJian，SHENXiaojie，LIUYah DepartmentofPathology，WuxiHigherHealthVocationalTechnologySchool，Wuxi214028 Keywords interleukin一10；adenovirusvector；rat；hepatocyte；protectioneffect Abstract Aim：Toconstructtheadenovirusvectorcarryinghumaninterleukin一10 (hIL一10)gene，andthenidentify theexpressionofhIL一10anddetectitsprotectioneffectsonrathepatocytesduringliverinjury．Methods：ThehIL一10gene wasamplifiedbyPCR from templateplasmidpORF—hlL一10，thendigestedwithendonucleaseandinsertedintopDC315to constructpDC315-hlL一10．TheplasmidpDC315一hlL一10andtheadenovirusvectorwerecotransfectedto293cellstogenerate thereplication-deficientrecombinantadenovirusAd5一hlL一10．Ad5一hlL一10wasusedtoinfectrathepatocytesandtheexpres— sionofhIL一10wasidentifiedbyimmunologymethod．Ratbepatocyteinjury modelwasconstructed，andtheprotection effectsofAd5一hIL．1