大蒜中提取SOD提取.docVIP

本科生课程论文封面 课程名称 现代生化技术 授课学期 学年至 学年 第 学期 学院 漓江学院 专 业 生物技术 组 员李翠200913007007 王志远200913007008 任课教师 刘晓灿老师 交稿日期 2010年10月 成绩 阅读教师签名 日 期 广西师范大学 大蒜细胞SOD的提取与分离 【摘要】 SOD（超氧化物歧化酶）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化.抗衰老.抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子进行歧化反应，生成氧和过氧化氢：。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用PH8.7的磷酸缓冲液。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。然后根据SOD抑制肾上腺素自氧化的效率，可间接测出SOD酶的活力。 【关键词】：超氧化物歧化酶 歧化反应 酶活力 【引言】超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 超氧化物歧化酶广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属酶类。它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子（O2）是人体氧代谢产物，它在体内过多积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。由于SOD能专一消除超氧阴离子而起到保护细胞的作用，SOD作为一种药用酶，具有广阔的应用前景，并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。 【正文】 本实验使用的是大蒜细胞中的超氧化物酶，利用SOD不溶于丙酮，可用丙酮将大蒜中的SOD析出。 实验材料和试剂 （1）新鲜蒜瓣，市售 （2）大蒜细胞，通过细胞培养技术获得 （3）磷酸缓冲液：0.05 PH7.8的磷酸缓冲溶液 （4）氯仿-乙醇混合溶剂：氯仿：无水乙醇=3:5（V/V） （5）丙酮：用前冷却至4-10° 碳酸盐缓冲溶液：0.05mol/L，PH10.2 EDTA溶液：0.1mol/L 肾上腺素夜：2mol/L 实验设备 研钵、试管、试管架、烧杯、滴管、移液管、吸耳球、数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）、可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）、离心机（上海安亭科学仪器厂） 操作方法 1.组织或细胞破碎 称取5克左右大蒜蒜瓣或大蒜细胞，置于研磨器中研磨，使组织或细胞破碎。 2.SOD的提取 将上述破碎的组织或细胞，加入2-3倍体积的0.05 mol/L ，PH7.8的磷酸缓冲液，继续研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解到缓冲液中，然后用离心机在5000 r / min ，离心15 min，弃沉淀，得提取液。 3.除杂蛋白 提取液加入0.25倍体积的氯仿—乙醇混合溶剂搅拌15分钟，5000r / min 离心15 min ，去杂蛋白沉淀，得粗酶液。 4.除杂蛋白 将上述粗酶液加入等体积的冷丙酮，搅拌15 min ，5000 r / min离心15min，得SOD沉淀。 将SOD沉淀溶于0.05 mol/L ，PH7.8的磷酸缓冲溶液，于55-60°热处理15 min，离心弃沉淀，得到SOD酶液。 将上述提取液、粗酶液和酶液分别取样，测定各自的SOD活力。 5.SOD活力测定 取3根小试管，按下表分别加进各种试剂和样品液。 （ml） 试剂 空白管 对照管 样品管 碳酸缓冲液 5.0 5.0 5.0 EDTA溶液 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 0.5 0.5 — 样