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酶工程复习资料 名词解释 酶(enzyme)：酶是由活细胞产生的，在细胞内、外一定条件下都能起催化作用的具有高效率和高度专一性的一类特殊蛋白质。 酶工程(enzyme engineering)：酶工程是酶学与工程学相互渗透、结合并发展而形成的一门新的技术科学，是一门从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应的原料转化为有用物质的技术。 固定化酶(immobilized enzyme)：通过物理或化学的手段，将酶固载在某种基体上。 酶活力（又称酶活性） (enzyme activity)（IU/gIU/mL)指酶催化一定化学反应的能力；用在一定条件下，所催化的反应初速度来表示；是研究酶的特性，酶制剂生产应用以及分离纯化时的一项必不可少的指标。 酶活力单位：表示酶活力大小的尺度；一个国际单位（IU）0C），mol底物或催化形成1(mol产物所需的酶量一个Kat(卡塔尔，酶活性国际单位)是指每秒钟内转化1mol底物所需的酶量，1 Kat = 6(107 IU。 调节基因： 启动基因： 操纵基因： 结构基因： 酶的抽提：指在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分融入溶剂的过程。 膜分离技术：借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离的技术称为膜分离技术。 离子交换层析：利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力不同而达到分离目的。 凝胶层析：以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离。 凝胶电泳——以聚丙烯酰胺为支持物，兼有分子筛效应。用于分离不同物理性质（如大小、形状、等电点等）的分子。 纯化倍数是纯化后的比活除以纯化前的比活。 固定化细胞发酵：固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞称为固定化细胞 发酵动力学：是研究发酵过程中速率及其影响因素的科学。包括细胞生长动力学、反应基质消耗动力学和酶生成动力学等，通过这些研究了解酶的生物合成模式，对发酵条件的优化控制,提高酶产量具有重要的理论指导意义。 酶分子修饰：通过各种方法可使酶分子结构发生某些变化，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程。 通过主链的“切割”、“剪接”和侧链基团的“化学修饰”对酶蛋白进行分子改造，以改变其理化性质及生物活性，这种应用化学方法对酶分子施行种种“手术”的技术，称为酶分子的化学修饰。 2、什么是酶的专一性？ 酶对它所作用的底物有严格的选择性，一种酶只能作用于一类化合物或特定的化学键，这种现象称为酶的专一性。其专一性分为结构专一性和立体异构专一性，其中，结构专一性包括只作用于一种底物的称为绝对专一性和一种酶可作用于一类化合物或一种化学键的称为相对专一性。 3、简述酶活力测定的步骤。 酶活力测定均包括两个阶段：首先要在一定的条件下，酶与其作用底物反应一段时间，然后再测定反应液中底物或产物变化的量。①选择底物，配制底物溶液②确定酶促反应条件：PH、温度等③准确计时并终止反应④运用各种检测技术，快速、简便、准确的测量变化量 5、简述固定化酶的活力测定方法有哪些？ 固定化酶的活力测定方法可用终止反应法或连续反应法。其中终止法包括：化学法、放射性化学法、酶偶联法；连续反应法包括：光谱吸收法（分光光度法和荧光法）、量气法、量热法、偶联的连续法。 6、酶的生产方法有哪些？ ①酶的天然产物提取②酶的发酵生产 7、酶工程的研究内容有哪些？ 按照现在的观点，酶工程主要研究的内容有：1、酶的大批量生产、应用2、酶的分离纯化3、酶的固定化和固定化酶反应器4、新酶的开发和应用5、遗传修饰酶的研究6、酶生产中基因工程7、抗体酶、核酸酶的研究8、酶分子改造与修饰9、酶的结构与功能关系10、模拟酶、合成酶以及酶分子的人工设计等。 8、酶分离纯化的基本环节有哪些？ 样品组织→预处理（破碎、抽提、离心分离）→无细胞抽提液→粗分离（提取、盐析、沉淀）细分离（层析）→成品加工、浓缩干燥 9、酶液制备的过程有哪些？ 酶溶液的制备包括：材料预处理及细胞破碎、抽提、净化脱色、抽提液的浓缩等几个步骤 10、细胞破碎的方法有哪些？ 细胞破碎：物理和化学两大类方法 物理破碎：研磨（手磨，球磨和石磨），机械捣碎（匀浆器和高速组织捣碎器等），高压法，爆破性减压法，专用波振荡，快速冷冻融化法等。 化学破碎：渗透作用，自溶，酶处理，表面活性剂 11、说明有机溶剂沉淀分离法的优缺点。 优点：①乙醇等有机溶剂易挥发除去，不会残留于成品中，产品跟纯净（不需要脱盐处理）；②有机溶剂密度低，沉淀物与母液间的密度差较大，分离容易，适于用离心分离收集沉淀物。 缺点：①容易使蛋白质变性，操作需要在低温下进行，使用上有一定的局限。②采用大量有机溶剂，成本较高。③有机溶剂易燃易爆，工业生产上车间和设备