高效液相色谱法测定大鼠血浆中白藜芦醇含量及其药物代谢动力学.docxVIP

课程平时考核作业题目高效液相色谱法测定大鼠血浆中白藜芦醇含量及其药物代谢动力学_____________________________成绩课程名称 生物药剂学与药物动力学 学 院 华西药学院 考核序号 1 专 业 药 学 年级班级 2008级2班学生姓名 陈宇学 号 0845051028完成日期 2011年 5月 18 日高效液相色谱法测定大鼠血浆中白藜芦醇含量及其药物代谢动力学Determination of Resveratrol in Rat Plasma by High Performance Liquid Chromatography and Its Pharmacokinetics 1 实验目的白藜芦醇(resveratrol，RES)化学名称为反-3，5，4’-三羟基-1，2-二苯乙烯(亦称芪三酚)，是重要的天然活性化合物[]，是许多植物在受到真菌感染、紫外照射或病理状况下产生的-种多酚类植物抗毒素，目前已知7O多种天然植物中含有RES，主要存在于葡萄、葡萄汁、红酒及其他植物提取物中。现已证实RES具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗心血管疾病、抗血小板聚集、调节免疫、保护肝脏及雌激素样作用[]。目前，有文献报道采用现代仪器分析方法，如气相色谱-质谱、毛细管电泳和高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)测定酒或食物中的RES含量。大量体内与体外实验表明，RES具有广泛的生物学活性，但有关RES在大鼠体内的药物代谢动力学研究报道甚少。本实验建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定大鼠血浆中白藜芦醇浓度，并用该法研究大鼠静脉注射白藜芦醇后的药物代谢动力学，为该药的体内过程及应用提供理论和实验依据。2 材料2.1 实验动物Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠，质量(180±20)g，合格证号为皖医实动准字01号，由安徽医科大学实验动物中心提供，实验前禁食12h，但可以自由饮水。1.2 实验仪器岛津高效液相色谱仪：包括LC-10AT泵、CBM-10Alite控制器、SPD-10Avp紫外检测器、CTO-10ASvp柱温箱、LC-Solution工作站；XW-80A微型旋涡混合器：上海医大仪器厂；TGL-l6GB台式高速离心机：上海安亭科学仪器厂；BP211D型电子天平：德国Sartorius公司；JL-l8O超声仪。1.3 药品与试剂RES：成都兰贝植化科技有限公司，含量≥98%，批号081228；乙腈：色谱纯，天津市恒星化学试剂制造有限公司；甲醇：色谱纯，江苏汉邦科技有限公司；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。3 方法3.1 色谱条件色谱柱：Shimadzu VP-ODS(5μm，150mmX46mm)；流动相：乙腈-水(35：65)；流速：1.0ml/min；紫外检测波长：303nm；柱温25℃；进样量：20μl；灵敏度：0.001AUFS。3.2 RES标准液配制精密称取RES5.0mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，使母液浓度为0.50mg/ml。并配制标准品相应系列的浓度、配制相应标准曲线及质控浓度。整个实验配制RES浓度过程是在室温避光条件下操作，该条件下分析样品中RES稳定性良好。3.3 血浆样品采集取SD雄性大鼠，实验前12h开始禁食不禁水，尾部静脉注射RES20mg/kg，于给药后5，10，30，60，90，l20，180，240，360，420min取血，置于肝素化试管中，12000r/min离心5min，分离血浆，即刻血浆样品经过相应处理后，采用HPLC对其进行分析。3.4 血浆样品处理取血浆200μm置于1.5mlEppendorf(EP)管中，加入400μl乙腈沉淀蛋白，于涡旋混合器上混匀3min后，12000r/min离心5min。取上清液20μl进样，峰面积外标法定量分析。4考察参数及意义4.1方法的专属性在本色谱条件下，对空白血浆、对照品血浆及大鼠静脉注射RES 5min后血浆样品进行HPLC分析。对HPLC色谱图进行分析，如样品色谱峰形良好，理论塔板数大于1000，血浆中杂质与RES分离良好（分离度1.5），且杂质不干扰样品的测定，则该方法具有较高的专属性。4.2线性范围及最低检测限在每20μl空白血浆中，分别加入RES系列标准品溶液，配制血浆中RES浓度分别为0.023，0.092，0.184，0.368，0.738，1.480，2.950，5.900，11.800和23.600μg/ml。