黄孢原毛平革菌对重金属镉的吸附作用.docxVIP

黄孢原毛平革菌对重金属镉的吸附作用（实验方案）1材料与方法1.1仪器与试剂干燥箱、灭菌锅、生化培养箱、恒温水浴振荡器，原子吸收分光光度计，试剂均采用国产的分析纯：溶液初始PH值的调节：0.1-N的HNO3和0.1-N的NaOH。1.2菌种来源黄孢原毛平革菌（phanerochaetechrysosporium GIM）1.3培养基1.3.1 固体培养基采用马铃薯葡萄糖培养基PDA培养基：（用于活化黄孢原毛平革菌）20%马铃薯1L，葡萄糖20g，KH2PO4 3g，MgSO4˙7H2O 1.5g,维生素B1 Trace 8mg,琼脂20g,PH自然，按比例配制2000mL,培养基分装到8个锥形瓶，121℃灭菌20min备用。培养基PH值为自然PH值，P. chrysosporium在30度的条件下培养7d1.3.2 液体培养基液体培养基成分（g/L）:FeSO4 0.005, NaHCO3 0.05, CaCl2 0.1, KCl 0.1, NaCl 0.2 MgSO4 .7H2O 0.25, KH2PO4 0.5, 蛋白胨10.0，葡萄糖20.0，蒸馏水1L ，液体培养基的PH值为自然PH值。1.4 菌丝球的培养将平板上的P. chrysosporium的孢子刮入无菌水中，形成孢子悬液，然后将定量悬液加入到液体培养基中，于30℃，150rpm的条件下振荡培养37-42h。过滤收集菌丝球，取出部分于烘箱中（80℃，4h）烘干至恒重，测定其干湿比，其余用无菌生理盐水浸泡，存放于冰箱内，备用。1.5 吸附研究为消除玻璃仪器器壁对吸附实验的干扰，所用玻璃器皿洗涤后，均用稀硝酸浸泡12h，洗净，烘干备用。配制一定浓度一定初始PH值的Cd2+, 溶液，移取100ml倒入250ml的锥形瓶中，加入干重0.1g的P. chrysosporium菌丝球，置于水浴恒温振荡器中，于30℃、150rpm的条件下进行P. chrysosporium菌丝球吸附Cd2+、研究。入菌丝球即开始振荡计时，定时取样（每10min取一次样）吸附时间24h，用3510原子吸收分光光度计(AAS)测定溶液中剩余的金属离子浓度，测三次，取其平均值。1.6 计算公式吸附量=（初始浓度—终浓度）×溶液体积/细胞干重其表示单位为mg金属/g细胞吸附率=（初始浓度—终浓度）/初始浓度×100%1.7 Cd2+浓度测定向6个150ml的三角瓶中，分别加入镉标准溶液浓度为0.00.40、0.60、0.80、1.00、5.00、10.00、20.00Mg/L,用ICP-OES测其对应浓度的吸收峰面积，以各峰面积为纵坐标，镉浓度为横坐标作标准曲线，计算回归方程（y=12609.82X-1384.35 R2=0.99952）1.81.镉标准储备液：称取0.5000g金属镉粉（光谱纯），溶于25ml(1+5)HNO3(微热溶解)。冷却，移入500ml容量瓶中，用蒸馏去离子水稀释并定容，此溶液每毫升含1.0mg镉2.镉标准使用液：往一100ml容量瓶中吸取10.0ml镉标准储备液，用水稀释至标线，摇匀备用。往另一100ml容量瓶中吸取5.0ml稀释后的标准储备液，用水稀释至标线即得每毫升含5ug镉的标准使用液。3.镉标准溶液的配制：①准确吸取5ml的1.000g/L标准储备液到100ml容量瓶中，用0.2%的硝酸定容至刻度，配制成5mg/L的溶液②从50mg/L的溶液中取10ml到100ml的容量瓶，用0.2%的硝酸定容至刻度，配制成5mg/L的溶液：③准确吸取0、4.00、8.00、12.00、16.00、20.00ml，5.00mg/L的溶液于100ml容量瓶中，用0.2%的硝酸定容至刻度，配制成浓度0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mg/L的标准系列溶液，贴上标签，待用。2.1初始PH对吸附的影响分别设置初始PH浓度为2、3、4、5、6、7，120rpm 30℃ , 0.1g黄孢干重、吸附24h，Cd2+=53.75mg/L配制液体培养基，然后分装于18个100ml的锥形瓶中，用HCI和NaOH溶液调节其PH值分别为2-7。 105度蒸汽灭菌30min，冷却后接种菌丝球，整个过程无菌操作，120rpm 30℃条件下培养。设置三个平行实验，将浓度为53.75mg/L的隔离子加入到培养基中，取样品于离心管中. 1000r/min离心15分钟，取上清液于比色皿中，测定样品中金属离子浓度。2.2 吸附时间对吸附的影响PH=5.9 , 120rpm 30℃ , 0.1g黄孢干重、Cd2+=53.75mg/L将 0.1g 新鲜菌丝体接入装有 100m L Cd2+金属溶液的锥形瓶中，Cd 2+浓度均为 53.75 mg/L，于 30℃、转速为