转染miR-146a对肺泡巨噬细胞中核因子-κB表达的影响.pdfVIP

· 2814 · 广东医学 2014年9月 第35卷第 l8期 GuangdongMedicalJournalSep．2014，Vo1．35，No．18 转染 miR一146a对肺泡 巨噬细胞 中核 因子 一KB 表达的影响米 聂成 ，刘芬 ，曾振国 ，詹以安 ，邓文刚 ，卿城 ，邵强 ，丁成志 ，揭克敏 ，钱克俭 南昌大学第一附属医院重症医学科(南昌330006)；南昌大学医学院(南昌330006) 【摘要】 目的 观察肺泡巨噬细胞转染miR一146a后细胞浆与细胞核内核因子一KB(NF—KB)表达的变化， 探讨 miR一146a调控肺泡 巨噬细胞炎症反应 的可能机制 。方法 将 NR8383大鼠肺泡 巨噬细胞分成两组 ：一组为 转染组，转染50nmol／LPre—miR miR一146aPrecursors；另一组为对照组，转染 50nmolCy 3一labeledPre— miR NegativeControl。两组细胞转染24h后加入含脂多糖培养基 (终浓度 1g／mL)，培养6h后收集细胞，分别 提取细胞浆蛋 白与细胞核蛋 白，采用Westernblot方法检测 NF—KBp65蛋 白的表达。结果 转染组miR一146a 表达较对照组上调 (P0．01)。转染组细胞浆 内NF—KBp65蛋 白表达较对照组上调 (P0．05)，而细胞核内 NF—KBp65蛋 白表达较对照组下调 (P0．05)。结论 肺泡巨噬细胞转染miR一146a可抑制NF—KB核转位，推 测 miR一146a通过此机制减轻肺泡 巨噬细胞炎症反应 。 【关键词】肺泡巨噬细胞；miR一146a；核因子一KB；核转位；脂多糖 Effectsofm iR 一146atransfectiononnuclearfactor—KB expressionofalveolarmacrophage． NIE Cheng ，LIU Fen，ZENGZhen—guo，ZHANYi—an，DENGWen—gnng，QmGCheng，SHAOQiang，DINGCheng—zhi，JIEKe— min，QIANKe-jian． CriticalCareMedicine，theFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity，Nanchang330006， China Correspondingauthor：QIANKe—jian．E—mail：qkj0607@sohu．corn A【bstract】 0bjective ToexploretheplausiblemechanismthatmiR一146amodulatestheinflammatoryresponse inalveolarmacrophagebycomparingnuclearfactor—KB (NF—KB)expressionbetweencytoplasmandnucleus．Methods Alveolarmacrophagesfromrat(NR8383)weredividedintotwogroups：GroupTransfected(transfectedwithPre— miR miR一146aprecursors)andGroupControl(transfectedwithCy 3一labeledPre—miR negativecontro1)．After 24一hourtransfeetion，bothgroupswereculturedincompletemedium withlipopolysaccharidechargefor6hours．NF—KB p65proteinsrfomcytoplasmandnucleuswereextractedanddeterminedbyWestern blot．Results ComparedtoCroup Control，miR一146aexpressionofGroupTransfectedwassignificantlyup—regulated(P0．01)，sowastheComparedto CroupControl，thecytoplasmNF—KBp65expressionofGroupTransfectedwasalsosignificantlyup—regulated(P 0．05)，whilethenuclearNF—KBp65expressionwassignificantlydown—regulated(P0．05)．Conclusion Transfec— t