姜黄素逆转人结肠癌细胞HcT8／VcR的双向凝胶电泳技术的建立及优化.PDF

第３３卷 第６期 世界科技研究与发展 Ｖｏｌ．３３ Ｎｏ．６ 　 　 ２０１１年１２月 １０７４－１０７７页 ＷＯＲＬＤＳＣＩＴＥＣＨＲ＆Ｄ Ｄｅｃ．２０１１ ｐｐ．１０７４－１０７７ 姜黄素逆转人结肠癌细胞 ＨＣＴ８／ＶＣＲ的双向凝胶 电泳技术的建立及优化  李　雷　傅仲学 　覃　勇　卢伟东　吴星烨　汤为学 （重庆医科大学附属第一医院外三科，重庆４０００１６） 摘　要：目的建立并优化姜黄素逆转人结肠癌细胞 ＨＣＴ８／ＶＣＲ蛋白质组的双向电泳技术。方法 姜黄素作用于人结肠癌细胞 ＨＣＴ８／ＶＣＲ，提取蛋白质。对双向凝胶电泳中蛋白质样品的处理，蛋白上样量，ＩＰＧ胶条的选择，以及聚焦条件等进行调整和优化。 结果 采用瓶内刮取的方法裂解细胞，ｐＨ３１０ＮＬ的胶条，上样量２００ｕｇ，延长除盐时间，聚焦６００００伏小时，可以得到分辨率较高、 重复性较好的双向电泳图谱。结论初步建立了分辨率较高且重复性较好的姜黄素逆转人结肠癌细胞ＨＣＴ８／ＶＣＲ蛋白质双向凝 胶电泳图谱。 关键词：蛋白质组学；双向凝胶电泳；姜黄素；多药耐药；结肠癌 中图分类号：Ｒ３３１　　　文献标识码：Ａ　　　 ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＴｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｆｏｒ  ＭｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＲｅｖｅｒｓｉｎｇｏｆＣｕｒｃｕｍｉｎｏｎＨｕｍａｎＣｏｌｏｎＣａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ８／ＶＣＲＣｅｌｌｓ  ＬＩＬｅｉ　ＦＵＺｈｏｎｇｘｕｅ 　ＱＩＮＹｏｎｇ　ＬＵＷｅｉｄｏｎｇ　ＷＵＸｉｎｇｙｅ　ＴＡＮＧＷｅｉｘｕｅ （ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅａｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｍｅｔｈｏｄｆｏｒｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｖｅｒｓｉｎｇｏｆｃｕｒｃｕｍｉｎｏｎ ｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ８／ＶＣＲｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｆｔｅｒｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ８／ＶＣＲｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｃｕｒｃｕｍｉｎ，ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｄｅａｌｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎｓａｍｐｌｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ，ｔｈｅｃｈｏｉｃｅｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｐＨｇｒａｄｉｅｎｔ（ＩＰＧ）ｓｔｒｉｐｓ，ｉｓｏｅ ｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ（ＩＥＦ）ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｂｅｓｔ２Ｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｃｏｕｌｄｂｅ ｄｏｎｅｔｈｒｏｕｇｈｌｏａｄｉｎｇ２００ｕｇｏｆｐｒｏｔｅｉｎｌｙｓａｔｅｗｈｉｃｈｉｓｄｉｒｅｃｔｌｙｓｃｒａｐｅｄｏｆｆｆｒｏｍｔｈｅｐｌａｔｅｓ，ｕｓｉｎｇｔｈｅｎｏｎｌｉｎｅａｒＩＰＧｓｔｒｉｐａｎｄｌｏｎｇｅｒｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｆｏｃｕｓｉｎｇｒｕｎｓｔｏｅｌｉｍｉｎａｔｅｓａｌｔｓ，ａｎｄ６００００Ｖｏｌｔｓ．Ｈｏｕｒｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴ