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姜黄素逆转人结肠癌细胞HcT8/VcR的双向凝胶电泳技术的建立及优化
第33卷 第6期 世界科技研究与发展 Vol.33 No.6
2011年12月 1074-1077页 WORLDSCITECHR&D Dec.2011 pp.1074-1077
姜黄素逆转人结肠癌细胞 HCT8/VCR的双向凝胶
电泳技术的建立及优化
李 雷 傅仲学 覃 勇 卢伟东 吴星烨 汤为学
(重庆医科大学附属第一医院外三科,重庆400016)
摘 要:目的建立并优化姜黄素逆转人结肠癌细胞 HCT8/VCR蛋白质组的双向电泳技术。方法 姜黄素作用于人结肠癌细胞
HCT8/VCR,提取蛋白质。对双向凝胶电泳中蛋白质样品的处理,蛋白上样量,IPG胶条的选择,以及聚焦条件等进行调整和优化。
结果 采用瓶内刮取的方法裂解细胞,pH310NL的胶条,上样量200ug,延长除盐时间,聚焦60000伏小时,可以得到分辨率较高、
重复性较好的双向电泳图谱。结论初步建立了分辨率较高且重复性较好的姜黄素逆转人结肠癌细胞HCT8/VCR蛋白质双向凝
胶电泳图谱。
关键词:蛋白质组学;双向凝胶电泳;姜黄素;多药耐药;结肠癌
中图分类号:R331 文献标识码:A
EstablishmentandOptimizationofTwodimensionalGelElectrophoresisfor
MultidrugresistanceReversingofCurcuminonHumanColonCarcinomaHCT8/VCRCells
LILei FUZhongxue QINYong LUWeidong WUXingye TANGWeixue
(TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016)
Abstract:ObjectiveToestablishandoptimizeatwodimensionalelectrophoresismethodformultidrugresistancereversingofcurcuminon
humancoloncarcinomaHCT8/VCRcells.MethodsAftertheculturedcoloncarcinomaHCT8/VCRcellsweretreatedbycurcumin,the
proteinswereextracted.Themethodofdealwithproteinsamples,proteinquantities,thechoiceofimmobilizedpHgradient(IPG)strips,isoe
lectricfocusing(IEF)conditionswereusedforestablishingtwodimensionalelectrophoresis.ResultsThebest2Dseparationresultscouldbe
donethroughloading200ugofproteinlysatewhichisdirectlyscrapedofffromtheplates,usingthenonlinearIPGstripandlongerisoelectric
focusingrunstoeliminatesalts,and60000Volts.Hours.ConclusionT
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