兔骨髓基质细胞与生物活性玻璃支架的相容性.pdfVIP

中医正骨2008年1月第20卷第1期 (总009)·9 · 兔骨髓基质细胞与生物活性玻璃支架的相容性 山东中医药大学附属医院(济南 250011) 徐展望 张建新 常 峰 摘 要 目的：探讨应用兔骨髓基质细胞与生物活性玻璃复合培养构建组织工程化人工骨的可行性。方法：将体外分离培养的 兔骨髓基质细胞，经向成骨方向诱导分化后，与生物活性玻璃进行联合立体培养，通过扫描电镜观察骨髓基质细胞在生物活性玻 璃上的生长情况。结果：骨髓基质细胞可在体外增殖和向成骨方向分化，并且可在生物活性玻璃上黏附和铺展。结论：骨谴基质 细胞与生物活性玻璃复合培养可构建具有活细胞成分的组织工程化人工骨。 主题词 骨髓基质细胞 生物活性玻璃 复合培养 组织工程化人工骨 实验研究 动物 免 骨缺损一直是骨科临床的重点和难点，组织工程方法的 直至培养液完全淹没材料。仍将材料置于c 培养箱内静止 出现为骨缺损的修复提供了一种理想的治疗方法。组织工程 培养24小时后再次按上述方法收集等量的细胞2次接种于 主要包括三方面的内容：①种子细胞的筛选和体外分离培养； 材料表面，静止培养4小时后加入条件培养液继续培养 以 ②生物支架材料；③组织构建。要完成组织的构建必须寻找 后隔天以条件培养液换液1次，共1周。 一 种合适的生物支架材料 本试验将经过成骨诱导的骨髓基 1．3 扫描电镜观察 将联合培养1天、7天的细胞与生物活 质细胞接种于具有三维立体结构的支架材料生物活性玻璃， 性玻璃复合体标本分别取出后，经Palade缓冲液漂洗，戊二醛 进行立体培养，通过扫描电镜观察骨髓基质细胞在生物活性 固定、丙酮梯度脱水、乙酸异戊酯置换，临界点干燥，表面喷金 玻璃上的生长情况，发现兔骨髓基质细胞可在生物活性玻璃 后扫描电镜观察生物活性玻璃的形态结构、孔隙率和孔隙大 中进行良好的生长，证实了体外构建组织工程化人工骨的可 小以及细胞在其上的生长情况(山东师范大学电镜室)。 行性，为进一步利用其进行骨缺损的修复打下了良好的基础。 2 结 果 1 材料和方法 2 I 倒置相差显微镜下观察 细胞接种3o分钟内即可以见 1．1材料 纯种新西兰大白兔 山东省农科院提供，许可证 到细胞贴壁。刚贴壁的细胞呈圆形，贴壁后细胞不再呈现明 号：SCXK(鲁)NO，c 培养箱(美国F．s)，RPMI一 亮的球形，晃动培养瓶时细胞不会漂动，随着接种时间的延 1640培养基(~ibeo)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料研 长，细胞逐渐增多，基本上呈现长梭形的外观。其间混杂有大 究所)，Ficoll淋巴细胞分离液(上海华精生物高科技有限公 量的小圆形细胞，胞体小而透明，是一些血系细胞。在培养液 司)，地塞米松、肛甘油磷酸钠、维生素C、四环素盐酸盐、胰蛋 中也有脱落悬浮的血系细胞。后每2～3天换液，可见多角形 白酶及I，谷氨酰胺(Sig~ra)，巴比妥钠，倒置相差显微镜(美国 细胞数目增加很快。小圆形细胞随着换液次数的增加逐渐减 AO)，扫描电镜等。 少直至消失。约在第10—14天后，贴壁细胞基本长满培养瓶 1．2 方法 ①兔骨髓基质细胞的体外分离培养及传代培养： 底部。经过诱导分化后细胞出现向多种形态分化，出现星形、 取2月龄的新西兰大白兔，雌雄不限，按本实验所建立的兔骨 多角形等。 髓基质细胞分离培养体系…获得原代及传代兔骨髓基质细 2．2 扫描电镜观察 生物活性玻璃具有网丝状的多孔结构， 胞。在第1次传代24小时后加入条件培养液(原培养液中加 孔隙率为80％左右。骨髓基质细胞与生物活性玻璃复合培养 入 甘油磷酸钠10 lnrnol·L～，地塞米松10～r l01· ，维生素 1天后，分布于生物活性玻璃中和孔壁上的细胞数目较少，细 C 50 ·L )。以后约5～6天传代细胞接近融台为单层，再 胞跨越微孔表面或向孔内长入(附图左)