葡萄酒中多种有机酸测定.docVIP

葡萄酒中多种有机酸测定摘要：建立了高效液相色谱法测定葡萄酒中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸、草酸等几种有机酸的方法。采用C18柱分离，以磷酸盐为流动相，测定波长为214nm，回收率在88％～96％之间，相对标准偏差RSD%＜5。方法简单易行，回收率及重复性较好，实用性突出。 关键词：高效液相色谱法；葡萄酒；有机酸 有机酸的检测方法有很多种，主要有:酸碱滴定法、分光光度计法、酶法、薄层色谱法、气相色谱法、离子色谱法法、电泳法等，但是这些方法一般要进行预分离、衍生化等繁琐的前处理。分光光度法是以有机酸和一些特定物质的反应为机理，能够生成在一定波长下有最大吸收峰的有色物质。但该法易受其他物质的干扰，通常需要将提取液进行沉淀、离子交换树脂等前处理纯化，因此步骤繁冗。酶法，虽然特异性较强，能够测定有机酸的构型，但是每次只能测定一种有机酸，比较耗时。气相色谱法的灵敏度和选择性相对较好，但是由于主要的短链有机酸是非挥发性酸，需要将有机酸衍生化，步骤较为繁琐，且常因为衍生化反应不易定量而直接影响测定结果的准确性[1]，因而使气相色谱法的应用受到限制。高效液相色谱法是目前普遍采用的分析有机酸的方法，常用的是反相高效液相色谱法（RT-HPLC）和离子交换色谱法。这两种方法中前者是用C18色谱柱，后者是用离子交换树脂柱[2-5]。而且能达到同时分离的有机酸种类较少，所以在现代最为成熟的技术就是HPLC技术。[6]HPLC分析有机酸不仅简便快速，而且选择性好、准确度高。在高效液相色谱法检测葡萄酒中的有机酸时，最重要的是选择最佳的色谱分离条件。这些条件中涉及流动相的pH值、流速、柱温、检测波长等等。流动相配比影响着流动相的pH值，从而对柱效和峰的分离均有影响；流速同样是影响其分离效果的一个重要因素，流速过低则分离时间过长、柱效差，而流速过高又导致峰挤在一起分不开；根据色谱理论， 柱温是影响柱效和分离度的主要因素，柱温升高可以降低流动相的粘度和提高树脂的传质效率，但是太高又会破坏色谱柱，所以色谱条件的选择是相当复杂的,要综合众多的考虑因素。 1 试验部分 1.1 仪器与器材 Shimadzu LC-20A 液相色谱仪、SPD-M20A二级管阵列检测器，SIL-20AC自动进样器、CTO-20A柱温箱、CBM-20A 系统控制器；离心机；分析天平：感量0.0001g；针式滤器：0.2?m（聚醚砜）。 1.2 试剂 磷酸二氢钾、磷酸二氢氨、磷酸（分析纯）；乙腈、甲醇（色谱纯）；超纯水（电阻18.2 MΩ）。 1.3 标准样品 酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸、草酸的标准品由德国 Dr Ehrenstorfer GmbH 公司提供。 2 试验方法 2.1 标准溶液的配制 分别称取有机酸标准品100mg左右至10mL棕色容量瓶中，用少量水溶解，震荡超声至完全溶解，用水定容至刻度摇匀，则每种标准品浓度都在10mg/mL左右，于4度冰箱中储存。 2.2 样品前处理方法 取1mL葡萄酒样品，至10mL容量瓶中，用超纯水定容至10mL，摇匀，8000转离心15min，0.2?m的针式滤器（聚醚砜）过滤，滤液用于液相色谱测定。 2.3 高效液相色谱条件 色谱柱：ST PAK C18-ES 5?m，250*4.6mm，120A； 流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾，磷酸调pH值至2.5； 流速：0.5mL/min； 检测波长：214nm； 柱温：40℃； 进样量：20?L。 图1 多种有机酸标准品高效液相色谱图（依次为草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸） 3 结果与讨论 3.1 样品前处理 葡萄酒机体成分复杂，含有大量天然色素等组分，除糖之外，大部分在紫外区都有吸收，并且会在C18柱上有一定的保留，从保护色谱柱及提高分离效果的目的出发，从提高定量准确度的目的出发，都需要一定的前处理尽量去除这些杂质。对现在较成熟的各种前处理方法进行实验。大部分的资料都显示不需要前处理，直接稀释一定倍数直接测定。本方法先将葡萄酒稀释十倍，再用高速离心机离心，效果较好。 3.2流动相成分的选择 分别配制0.1mol/L磷酸二氢氨与0.1mol/L磷酸二氢钾，pH值调至3.0。充分平衡色谱柱后，对混标进行分析，考察不用的盐溶液对混标分离度的影响。实验结果表明，不同的磷酸盐对有机酸的分离度影响很小，因此，流动相固定为磷酸二氢钾。 分别配制0.02mol/L磷酸二氢钾与0.05mol/L磷酸二氢钾。充分平衡色谱柱后，对混标进行分析。考察不同离子浓度的流动相对混标的分离度以及保留时间的影响如何。实验结果表明，提高离子强度，对有机酸的分离度影响