硫化氢供体对实验性肝硬化大鼠门静脉压力影响及其相关酶学的研究.pdfVIP

摘 要 目的： 本课题将复制硫化氢(H2S)过载的正常和肝硬化大鼠模型，分别在 NO 、CO 抑制及不抑 制两种状态下，观察 H2S 含量过载对肝硬化大鼠门静脉压力的影响及其相关酶学的变化， 以探讨内源性 H2S 在肝硬化门静脉高压中的作用，进一步研究肝硬化发生发展的机制，为 肝硬化门静脉高压的临床治疗提供理论基础。 材料和方法： 1. 动物分组、肝硬化模型复制及干预剂实施：将72 只雌性SD 大鼠随机分为肝硬化模型 组（40 只），正常组（32 只）；肝硬化模型组大鼠皮下注射40% 四氯化碳棉籽油溶液,首剂 0.5ml/100g, 后每隔4 天注射一次, 每次0.3ml/100g, 共注射12 次, 15% 乙醇溶液作为唯一饮 用液体, 并给予高脂高胆固醇饲料。根据预实验肝硬化形成经验（第一次注射起实验第 52 天形成肝硬化模型）；正常组大鼠同期皮下注射生理盐水, 剂量同实验组, 采用标准饲料喂 养。造模结束后正常组大鼠随机分为4 组：正常非抑制（NF ）组,正常抑制（NC ）组，过载 H S 正常非抑制（SF）组和过载H S 正常抑制（SC ）组，每组8 只；肝硬化模型组随机分 2 2 为4 组：肝硬化非抑制（HF ）组，肝硬化抑制（HC ）组, 过载H2S 肝硬化非抑制（SHF） 组和过载H S 肝硬化抑制（SHC ）组，每组8 只；给予过载H S 组大鼠供体硫氢化钠（NaHS ） 2 2 56umol/kg.d-1 腹腔注射，NO 、CO 抑制组大鼠腹腔注射 L-NAME: 5mg·kg-1·d-1 和 ZnPP: 20umol·kg-1·d-1 颈部皮下注射,总时间为一周。 2. 结果观察：干预结束后，10%水合氯醛麻醉大鼠，应用静脉穿刺针接多导压力换能器 测量门静脉压力；测定门静脉血浆中H2S、NO 、CO 含量；HE 染色观察肝脏病理学变化； 应用免疫组化法观察肝门区门静脉血管内皮细胞和平滑肌细胞中CSE、HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达，并用计算机图文分析系统半定量检测其蛋白表达强弱，灰阶值越低说明表达越强； 采用Westblot 技术检测肝组织中CSE、HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达，用凝胶成像系统对 曝光后条带的灰度值进行分析, 同时用β-actin 校正加样量。实验数据用SPSS16.0 统计软件进 行分析，作单因素方差分析，用LSD 法对多个样本均数进行比较，P0.05 示差异具有统计 学意义。 结果： 1. 肝硬化大鼠模型复制 通过病理学观察，模型组大鼠肝脏均达到肝纤维化IV 级或V 级病理阶段，造模过程中 大鼠死亡率在正常范围（20% ）。 2. 大鼠门静脉压力变化 与NF 组相比，HF 、HC 、SHF 和SHC 组门静脉压力明显升高（p 均0.01 ）；与HF 相 比，HC 、SHF 组压力均降低（p均0.01 ）；SHC 组压力低于HC 组（p0.01 ）； 3. 大鼠门静脉血浆中H2S、CO、NO 含量变化 与NF 组相比，NC 、SF、SC 组血浆中H2S 含量升高（p 均0.05 ），NO 、CO 含量均降 I 低（p 均0.01 ），HF 组血浆中H S 含量降低（p0.01 ），NO 、CO 含量均升高（p 均0.01 ）； 2 与HF 组相比，HC 、SHF 和SHC 组血浆中H2S 含量均升高（p 均0.01 ），NO 、CO 含 量均降低（p 均0.01 ）；SHC 组H2S 含量高于HC 组（p0.01 ），NO 、CO 含量均低于HC 组（p 均0.01 ）； 4. 肝门区门静脉血管及肝组织中CSE、HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达 与NF 组相比，NC 、SF、SC 组门静脉血管及肝组织中CSE 蛋白表达均增强（p 均0.01 ）， HO-1 、iNOS 、eNOS 蛋白表达均减弱（p 均0.01 ），HF 组肝组织中CSE、eNOS 蛋白表达 减弱（p0.01 ），HO-1 、iNOS 蛋白表达均增强（p 均0.01 ），门静脉管壁中CSE 蛋白表达 减弱