分子标记技术及其在植物育种中应用.doc

分子标记技术及其在植物育种中应用摘要：概述各种常用分子标记技术RFLP，RAPD，AFLP，SSR，ISSR，SCAR，STS，CAPs的原理，并从种质资源的鉴别、基因定位、基因累加、异源目的基因的筛选、遗传图谱的构建等方面综述了分子标记技术在植物育种中的应用。 关键词：分子标记；植物育种 中图分类号：TS202.3文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)10-0043-04 Molecular Marker Technology and Its Application in Plant Breeding XU Li-fang1,Chen Ji-yan2,LUO Guang-ming1* (1. Department of Chinese Materia Medica, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006, China; 2. Department of Pharmacy, Yunyang MedicalCollege, Shiyan 442000, China) Abstract：The principals of several commonly used molecular markers including RFLP, RAPD, AFLP, SSR,ISSR, SCAR, STS and CAPs, are introduced and the applications of molecular markers in plant breeding are summarized from the aspects of varieties identification, gene localization, gene accumulation, selection of foreign gene, construction of genetic map. Key words：molecular marker; plant breeding 近年，随着生物技术的快速发展，分子标记技术在诸多领域得到应用，尤以农业、医药业、畜牧业等行业应用得最多。目前，分子标记种类较多，用于植物育种的主要有 RFLP，RAPD，AFLP，SSR，ISSR，SCAR，STS，CAPs。现分别介绍其原理及在植物育种上的应用。 1分子标记的原理 1.1限制性内切酶片段长度多态性（restriction frag-ment length polymorphism，RFLP，简称限制片段长度多态性） RFLP是以分子杂交技术为基础的标记技术，其原理是碱基的突变、缺失、重排或是一段DNA的重排或插入，导致限制性内切核苷酸酶的酶切位点分布发生改变，得到的切割片段在数量和长度上不同，从而产生多态性。用限制性内切酶切割基因得到不同片段，然后经琼脂糖凝胶电泳分离，印迹到尼龙膜或硝酸纤维膜上，再用DNA探针与同源序列杂交，经放射自显影或酶学检测。RFLP的优点是检测到的等位基因具有共显性，能区分纯合子和杂合子，能稳定遗传。 1.2随机扩增多态性DNA（random amplification polymorphism DNA，RAPD） RAPD以DNA聚合酶链式反应（PCR）为基础，它的引物是一段任意寡聚脱氧核糖核苷酸单链片段（长度通常为8~10 bp），在基因组DNA上随机引物都有特定的结合位点区域。一旦此区域的碱基突变或是DNA插序、重排、缺失，均会引起结合位点分布的变化，从而引起PCR扩增产物在数量和长度上不同，产生多态性。加入随机引物，进行PCR扩增，得到长度不同的DNA片段，然后用凝胶电泳分离扩增片段，经染色显示相应区域内DNA的多态性。由于使用多个引物，多态性的检测可以扩大到整个基因组，因此RAPD可用于构建基因指纹图谱。它的优点是所需样品少，对DNA质量要求不高，成本相对较低，一套引物可用于分析不同的生物基因组，操作简单，检测速度快。 1.3扩增片段长度多态性（amplification fragment length polymorphism，AFLP） AFLP是通过限制性内切酶切割DNA产生不同长度的DNA片段来检测DNA的多态性。其原理是用限制性内切核苷酸酶酶切DNA，在DNA片段的两端加上带有特定序列的“接头”，然后用与接头互补的3’-端带有几个随机选择的核苷酸引物进行特异PCR扩增。只有与3’-端严格配对的DNA片段才能扩增。3’-端的核苷酸序列决定了DNA片段的特异性。最后用高分辨率测序凝胶将扩增产物分离，用放射性自显影或银染法检测。