双根清脑煎剂对血管性痴呆大鼠模型脑海马组织及血清SOD MDA影响 .doc

双根清脑煎剂对血管性痴呆大鼠模型脑海马组织及血清SOD MDA影响 吴颢昕　晋光荣　向红兵　林　靓 摘　要：采用从颈外动脉进行插管缓慢注入同种血栓栓子造成大鼠血管性痴呆模型。观察双根清脑煎剂及尼莫通对血管痴呆大鼠模型脑海马组织与血清SOD、MDA的影响。结果表明，双根清脑煎剂及尼莫通能显著升高SOD活性，且上调SOD/MDA值。 关键词：双根清脑煎荆；血管性痴呆；SOD；MDA 观察双根清脑煎剂及尼莫通对血管痴呆大鼠模型脑海马组织与血清SOD、MDA的影响，现将结果报道如下。 1 实验材料 1．1药品与试剂①双根清脑煎剂制备：板蓝根、葛根、郁金、凌霄花、薏苡仁。药材由南京中医药大学门诊部提供。煎煮方法：头煎加水量为药量的8倍，浸泡2h，煎1.5h；二煎加水量为药量的6倍，煎1h，两次药液混合，浓缩成100％药液，4℃保存备用。②尼莫通片：德国贝尔公司生产。用时研碎，配成0.5mg/mL混悬液。③SOD试剂盒由南京建成生物制品公司提供，批号MDA试剂盒由南京建成生物制品公司提供，批号 1．2实验动物SD(sprRgue：-Dawsley)大鼠，由南京中医药大学动物实验中心提供。合格证号：SCXK(苏)2002―0012。 1．3主要实验仪器80―2沉淀离心机：上海手术器械厂；752G紫外分光光度计：上海分析仪器厂；精密分析电子天平：上海天平仪器厂；恒温水浴箱：上海跃进医疗器械厂o 2 方法 2．1实验分组 动物选用SD雄性大鼠，体重250～300g。实验前适应性喂养1周，实验前和实验时自由饮水和摄食。采用随机对照方法分为假手术对照组、模型组、中药组及西药组。每组动物10只。 2．2动物模型制作无菌状态下同种SD大鼠左心室内采血，37℃温箱内干燥，研碎后200gm筛孔过筛制成栓子，应用时按栓子1mg加生理盐水0.3mL配制，摇匀成混悬液。0.4％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(40mg/kg)，颈正中切开皮肤，钝性分离右侧颈总动脉和颈外动脉，结扎颈外动脉远端，微动脉夹暂时夹闭颈总动脉，于颈外动脉远端切一小口，将连接注射器的中空细管逆行插至颈总动脉分叉处，在靠近已插入的细管处1-0缝线结扎，松开动脉夹，开放颈总动脉，注入混悬液0.5mL，使栓子通过颈内动脉进入颅内各动脉分支，堵塞微血管或/及小血管，造成多发性脑梗塞，结扎颈外动脉近端，缝合皮肤。假手术对照组中空细管只插到颈总动脉分叉处，不注入任何液体。 2．3 药物治疗模型组与假手术对照组给正常饲料喂养，用药组除正常饲料喂养外，中药组每只大鼠灌服双根清脑煎剂lmL(4g/kg)，西药组每只大鼠灌服尼莫通混悬液1mL(2mg/kg)，每日治疗1次，连续15天为1个疗程。 2．4大鼠脑海马组织MDA含量SOD活性的测定各实验组大鼠于疗程末次(即实验治疗后第15天)治疗或处理结束后1h以0.8％的戊巴比妥钠，按40mg/kg腹腔注射麻醉，分开大鼠颅骨，取出脑组织，在冰盒上迅速分离出海马组织，称重后加入预冷的生理盐水，制成10％海马匀浆液。4℃2500r/min离心15min，取上清液，严格按SOD、MDA的操作说明进行测试。 2．5大鼠血清MDA含量SOD活性的测定各实验组大鼠于疗程末次(即术后第15天)治疗或处理结束后1h以0.8％的戊巴比妥钠，按40mg/Kg腹腔注射麻醉，麻醉后仰卧固定，暴露心脏，自左心室底部刺入心脏取血5mL，置于含10％EDTA二钠30μL、抑肽酶40μL的试管中，4℃2500r/min离心15min，取上清液，严格按SOD、MDA的操作说明进行测试。 2．6统计学处理 各组大鼠脑海马组织、血清的SOD、MDA测定值均采用(x±s)表示，均数间两两比较采用LSD法。统计软件为SPSS11.5版本统计包软件统计分析。 3 结果 3．1脑海马组织SOD活性及MDA含量与对照组相比，模型组大鼠脑海马组织MDA含量明显升高，各治疗组则能显著降低MDA含量；与模型组相比，各治疗组对脑海马组织SOD活性略有上调，但无统计学差异；但各治疗组均能升高SOD/MDA的比值。 3．2血清SOD活性及MDA含量与对照组相比，模型组大鼠血清SOD活性明显下降。MDA含量明显升高，两者比值低于对照组，而各治疗组的SOD活性显著升高，MDA含量下降。SOD/MDA升高。见表2。 4 讨论 自由基是一个或多个不配对的原子或分子的总称。人体生理代谢即可产生自由基，但体内存在相应的自由基清除酶如SOD，通常情况下，机体自由基的生成与清除之间保持着动态平衡，不发生自由基连锁反应和组织损伤。但在组织损伤如脑缺血等病理情况下，自由基生成增多，且自由基清除