基因芯片技术在中医药诊治糖尿病及其并发症探究中应用.docVIP

基因芯片技术在中医药诊治糖尿病及其并发症探究中应用摘要：基因芯片技术是近年来兴起的一种分子生物学技术。该技术在医学界引起了广泛的关注，在中医药诊治糖尿病及其并发症的研究中应用也较多，具有广泛的应用前景。 关键词：基因芯片技术；糖尿病；中医药 中图分类号：B255，4；B2-03　文献标识码：A　文章编号：1673-7717(2007)11-2218-03 糖尿病(Diabetes mellltus，DM)是一种常见的内分泌代谢疾病，随着社会经济的发展、人们生活方式的改变及人口老龄化，糖尿病的发病率在全球范围内呈逐年增高趋势，已成为继心血管和肿瘤之后，严重威胁人们健康和生命的疾病。糖尿病的病因和发病机制复杂，多年来从分子水平探索糖尿病的发病机制及治疗靶点一直是人们研究的热点。传统的研究方法大多费时、费力且收效微。近年来出现的基因芯片技术，对医学界产生了具有深远意义的影响。中医药防治糖尿病及并发症，运用辨证论治，指导临床用药，有一定的优势和疗效。本文对基因芯片技术在中医药诊治糖尿病研究中的应用作一探讨。 1　基因芯片技术 1.1　基因芯片产生的背景及原理近年来，随着人类基因组计划(human genomic projects，HGP)研究的逐步深入，数以万计的基因序列和表达序列标签(expreessed sequencetags，ESTs)得到测定，GeneBank数据库中已含有300万个序列。研究重点将由发现新的基因转向研究基因的功能和探索疾病与基因表达问的关系，即由基因组时代转入后基因组时代。传统的研究方法诸如Northern杂交、斑点杂交、RNA酶保护实验、sI核酸酶分析等显然无法胜任如此浩繁的工作，迫切需要一种新的研究方法能以大规模、高通量的方式进行成千上万个基因在各种生理和病理状态下表达状况的研究以及分析大量的生物信息。基因芯片技术就是在这种背景下诞生的。基因芯片(gene chip)，又称DNA微矩阵(DNA mlcroarray)，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段有序地、高密度地排列固定于支持物上，待测的样品核酸分子经过标记，与固定在载体上的DNA阵列中的点按碱基配对原理同时进行杂交。杂交形式属于固一液杂交，与膜杂交相似。通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，检测杂交信号强度而获取样品分子的数量和序列信息，用计算机软件进行数据的比较和分析，从而对基因序列及功能进行大规模、高通量的研究。 1.2　基因芯片分类和优点 由于基因芯片的制备方法和应用范围的不同，可以将基因芯片依据不同的标准分为不同的种类。以载体材料区分，可以分为玻璃芯片、膜芯片、硅芯片和陶瓷芯片等。以制作方法区分，可分为原位合成芯片、直接点样芯片等。最根本的是依据载体上的基因种类区分，分为寡核苷酸芯片(oligonucleotide microarray)、cD-NA芯片(complementary DNA mlcroarray)。cDNA芯片的探针来源于cDNA文库、采集到的克隆或PCR产物，采用喷印法或点样法固定到玻璃或尼龙膜上。探针斑一般为直径100～300μm大小，等间距排列，一个标准尺寸的芯片表面目前最多可点3×105个cDNA克隆；寡核苷酸芯片采用原位合成的方法将不同的序列直接合成固定于玻璃表面，可实现高密度集成。基因芯片具有无可比拟的优点：①信息量高。一张1cm2左右大小的芯片一次可同时研究1～2万不同的已知或未知的靶基因片段，通过对比两种不同样品的杂交信号，可获得几十甚至上百个被诱导出现或消失的基因及被上调或下调的差异表达基因，而Southern、Northern或斑点杂交等均只能对某一个或几个已知的感兴趣基因分别进行研究。mRNA差异显示技术虽然也有很大的改进，可同时有多个差异条带显示。但与基因芯片相比要少得多。②透明性强。由于靶基因在载体上的分布是事先由操作者设计好的，故可直接得到不同的基因序列或序列片段，而不像mRNA差异显示技术等需要对表达差异的片段进一步克隆、测序等分析后才能知道其确切序列。③准确性高。基于碱基互补的原理，芯片技术不仅特异性强，而且没有差异显示技术假阳性率高的缺点。④自动化程度高。使用程序化操作只需1-2天就可以完成全部过程。 2　基因芯片技术在中医药诊治糖尿病及其并发症中的应用 中医学的整体观念认为人是一个有机的整体，构成人体的各个部分之间，结构上是相互联系的，功能上是相互协调和相互为用的，在病理上又是相互影响的，人体与自然环境有着密切的关系。中医药治疗糖尿病是从整体观出发，实施辨证论治，强调整体阴阳平衡，采取综合调节的措施。基因芯片技术研究是从整个基因组的层次来阐明所有基因在染色体上的位置、结构、基因产物的功能以及基因与基因之间的关系，具有鲜明的整体性。