太阴病脾虚寒湿证大鼠模型建立及机理探析.docVIP

太阴病脾虚寒湿证大鼠模型建立及机理探析摘要：目的：探求太阴病脾虚寒湿证客观性辨证指标。方法：实验大鼠连续14天每日经口灌服大黄与猪油造太阴病脾虚寒湿证模型。观察该模型大鼠的活动、体温等基本情况；取大鼠血用闻苯三酚法测大鼠小肠对D－木糖(D xylose)的吸收功能，能量代谢相关酶钠－钾－ATP酶(Na+－K+－ArPase)活性并观察胃、肝、脾、胰腺、小肠、结肠组织形态学改变。结果：模型大鼠活动减少，体温略低。小肠吸收D－木耱的功能减弱，Na+－K+－ATP酶的活性降低，胃黏膜萎缩，小肠肠上皮细胞轻度肿胀，肝细胞明显萎缩、肝细胞排列紊乱，胰腺细胞深染、内外分泌腺基本正常，结肠细胞核固缩、排列紊乱，脾脏体积显著缩小、脾小体数目减少。结论：D－木糖的吸收率，Na+－K+－ATP酶的活性以及胃、肝、小肠、脾、结肠的部分组织形态学改变可作为此证的客观诊断指标。 关键词：太阴病；脾虚寒湿证；动物模型；机理 中图分类号：R－332 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0058－03 《伤寒论》辨太阴病脉证并治，实质是辨太阴证范畴内的脾虚寒湿证等若干由具体病位与病性之证素所构成的证。基于脾胃病的多发性与《伤寒论》的相关论述并结合临床实际，笔者复制了太阴病脾虚寒湿证动物模型，并从动物的外观变化，体温，小肠吸收功能，能量代谢相关酶以及胃、肝、脾、胰腺、小肠、结肠组织形态学改变方面探讨该模型的机理。 1　材料和方法 1.1　实验材料 1.1.1　实验动物　wistar成年大鼠，24只，体重200―220g，雌雄各半，由湖南省长沙市开福区东创实验动物科技服务部[scxk(湘)2006―0001]提供。 1.1.2　药品及试剂大黄，由湖南中医药大学附属第一医院中药房提供；D－木糖由天津市光复精细化工研究所提供；D－木糖试剂盒、Na+－K+－ATP酶试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供。 1.1.3　主要实验器材DU－640型核酸／蛋白分析仪(美国)，80－2型离心沉淀机(上海手术器械厂)，SYC型超恒温水槽(巩义市英峪予华仪器厂)，DYB9－I型电动玻璃匀浆机(宁波新芝科器研究所)，860滑动型组织切片机(美国AO公司)。 1.2　实验方法 1.2.1　药物煎制及用法取生大黄720g，加水煮沸0.5h，过滤，浓缩至200％的水煎液，4℃保存。根据每只大鼠的公斤体重计算其给药量。 1.2.2　动物分组将动物随机分为2组，太阴病脾虚寒湿证模型组(简称模型组)、空白对照组，每组12只。 1.2.3　模型复制方法模型组大鼠禁食12h，上午200％生大黄水煎液灌胃，按10mL／kg，每日1次，下午精炼猪油灌胃，10mL／kg，每日1次，共计14天。空白组等计量的自来水。 1.2.4　外观及体温观察并记录造模中各组大鼠的毛发色泽、行为状态、饮食、大便等外观方面的变化。将体温表插入大鼠肛门(探头插入0.5era)，待读数稳定后，读取数值。 1.2.5　血浆D－木糖测定(间苯三酚法)各组大鼠，先灌服5％D－木糖溶液0.3g／kg(即O.60mL／kg)，1h后眼球取血，制备血浆，检测方法按试剂盒说明操作。 1.2.6　Na+－K+－ATPase活性测定断头处死大鼠，打开腹腔，在冰台迅速取出肝脏，称取O.5g左右，加9倍量的0.9％的生理盐水，在匀浆器中研磨成10％的肝组织匀浆，低温低速离心5mln，将离心好的匀浆留上清备用，检测方法按试剂盒说明操作。蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法。 1.2.7　光镜标本制备断头处死大鼠，取出肝、胃、脾、胰腺、小肠、结肠，用生理盐水冲洗干净，依次进行10％甲醛固定、酒精脱水、浸蜡、石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。 1.2.8　统计学方法实验数据以x±s表示，用$PSSl2.0统计软件进行统计学处理，采用t检验。 2　实验结果 2.1　外观指标 模型组大鼠，造模当日或第2天开始出现软便，继而出现便溏，肛门周围有污物，泄泻、食欲减少、活动减少、畏寒蜷缩，闭目无神；造模第5天出现体重逐日下降，懒动，肛温温度略降，喜聚堆，皮毛疏松无光泽。空白对照组大鼠饮食、大便正常，毛发有色泽，行为状态正常。 2.2　各组大鼠体温血浆D－木糖及肝脏Na+－K+－AT－Pase活性测定结果见表1。 2.3　各组大鼠组织形态学的变化 2.3.1　胃组织形态学变化模型组大鼠胃黏膜结构较正常明显萎缩，黏膜层及黏膜下层有炎性细胞浸润，细胞间间隙加宽，主细胞与壁细胞减少，细胞模糊，胞浆不均匀，壁细胞有肿胀及空泡样变，有典型的嗜酸样变细胞(见图1)。空白对照组大鼠胃黏膜