姜黄素对高脂血症大鼠肾皮质TGF-β1mRNA及MMP-2mRNA表达影响.docVIP

姜黄素对高脂血症大鼠肾皮质TGF-β1mRNA及MMP-2mRNA表达影响摘要：目的：探讨姜黄素防治高脂血症致肾脏损害的作用机理。方法：喂食高脂饲料造成大鼠高脂血症致肾脏损害模型，姜黄素(高、中、低剂量)同时干预给药12周，实验结束后，分别检测大鼠肾皮质TGF-β1mRNA和MMP-2mRNA的表达。结果：姜黄素高、中剂量组肾皮质TGF-β1表达较模型对照组显著减少，且姜黄素高剂量组显著少于低剂量组(P0.01)；姜黄素高剂量组肾皮质MMP-2mRNA表达较模型对照组明显增多，且明显多于低剂量组(P0.01)。结论：姜黄素能减少肾皮质TGF-β1mRNA表达，提高肾皮质MMP-2mRNA表达，呈量效依赖关系，从而有效地防治高脂血症致肾脏损害。 关键词：高脂血癌致肾脏损害；姜黄素；TGF-β1mRNA；MMP-2mRNA；实验研究 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)12-2543-03 高脂血症与肾脏损害关系密切，它作为一种重要、独立的致病因素参与肾脏疾病的发生和发展，导致肾脏系膜基质增多和肾小球硬化。现代中医学研究表明：肾小球系膜基质增多及硬化当属中医肾内微型瘕积，痰浊与瘀血的互相胶结是肾内微型?积的病理生理基础，因而祛除痰瘀至关重要。姜黄功能行气破瘀，行气能行津消痰，破瘀能活血除瘀。姜黄素是姜黄的有效药理成分，笔者前期研究发现：姜黄素能改善大鼠高脂血症致肾小球系膜基质增多等肾内微型?积的病变，为进一步探讨其作用机理，故开展了姜黄素对高脂血症大鼠肾皮质TGF-β1mRNA与MMP-2mRNA表达影响的实验研究。 1.实验材料 1.1实验动物　Wistar大鼠，雄性，体重(210±20)g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。 1.2药品与试剂　胆固醇(上海伯奥生物科技有限公司)，胆酸钠(杭州微生物试剂有限公司)，干鸡蛋黄粉(南通康德生物制品有限公司)，猪油(杭州联华在水一方超市)，姜黄素(上海三爱思试剂有限公司)，舒降之(杭州默沙东制药有限公司)，羧甲基纤维素钠(江苏省宜兴市通达化学有限公司)，Trlzol抽提试剂盒、RNA酶抑制剂、dNTP、Tap酶、Oligo(dT)(上海生物工程有限公司)，M-MuLV逆转录酶(美国MBI公司)。 2.实验方法 2.1动物分组　实验大鼠先适应性饲养1周，然后随机分为6组(每组10只)：正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、姜黄素高剂量组(C组)、姜黄素中剂量组(D组)、姜黄素低剂量组(E组)、舒降之组(F组)。 2.2实验方法　分组后，正常对照组喂食普通饲料。模型对照组喂食高脂饲料(普通饲料中加入3％胆固醇、1％胆酸钠、7.5％蛋白粉和10％猪油)，同时予1％羧甲基纤维素钠溶液每天灌胃1次；舒降之组、姜黄素低、中、高剂量组在喂食高脂饲料同时即干预给药，舒降之组：舒降之用1％羧甲基纤维素钠配成混悬液，按1.6mg/(kgd)灌胃给药；姜黄素低剂量组：姜黄素用1％羧甲基纤维素钠配成混悬液，按40mg/(kgd)灌胃给药；姜黄素中剂量组：姜黄素用1％羧甲基纤维索钠配成混悬液，按80mg/(kgd)灌胃给药；姜黄素高剂量组：姜黄素用1％羧甲基纤维素钠配成混悬液，按160mg/(kgd)灌胃给药。用药各组采用等容积不等浓度药液每天给药1次。灌胃前后1h禁食、禁水。各组观察治疗12周。 2.3检测方法　采用RT-PCR法检测肾皮质TGF-BImRNA和MMP-2mRNA的表达，每组随机检测5份样本，具体流程如下：(1)肾皮质总RNA的提取及浓度检测(紫外分光光度计测定每个RNA样品的OD/OD值在1.8～2.0之间)，然后进行逆转录；(2)引物根据PRIM-EB5.0引物设计软件设计，由上海生物工程公司合成；引物序列具体见表1。(3)多聚酶联式反应(PCR)：95℃预变性5min；95℃变性30s，退火30s(TGF-β1为59.3℃，MMP-2为56.7℃，GAPDH为50.7℃)，72~C延伸45s，共35个循环；72℃延伸10min。(4)PCR产物半定量分析：PCR产物行1.7％琼脂糖凝胶电泳，用Bio-Rad凝胶图像分析系统对电泳条带进行扫描分析，结果用目的基因/GAPDH的积分光密度值表示目的基因的相对表达量，积分光密度值=(条带灰度一背景灰度)x面积。 2.4统计方法　采用SPSS11.5 for Windows统计软件，对实验数据进行单因素方差分析，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，P0.05为有统计学显著性差异。 3.结果 3.1肾皮质TGF-β1mRNA表达情况模型对照组肾皮质TGF-β1mRNA表达较正常对照组显著增多(P0.01)；姜