川芎挥发油川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用.docVIP

川芎挥发油川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用摘要 目的:观察预防性应用川芎挥发油、川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法:用结扎双侧颈总动脉,造成小鼠脑缺血再灌注模型;观察川芎挥发油(3μl、6μl)、川芎嗪(0.5g#8226;kg-1、1g#8226;kg-1),对小鼠全脑缺血30分钟及再灌注60分钟后SOD活性、LDH活性、MDA含量的影响。结果:川芎嗪0.5g#8226;kg-1灌服,可显著提高脑组织LDH活性;川芎嗪0.5g#8226;kg-1、1g#8226;kg-1,川芎挥发油3μl、6μl灌服,可明显降低MDA含量;川芎嗪0.5g#8226;kg-1、1g#8226;kg-1、挥发油3μl可显著提高SOD活性;所有用药组都显著降低MDA/SOD比值。结论:预防性应用川芎挥发油、川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注损伤有一定程度的保护作用。 关键词 川芎挥发油 川芎嗪 脑缺血再灌注 乳酸脱氢酶 超氧化物歧化酶 丙二醛 小鼠 川芎是伞形科植物川芎的干燥根茎,为常用的活血化瘀药,有行气散瘀、祛风止痛之效。现代研究表明[1],川芎含阿魏酸、川芎嗪、挥发油、大黄酚、瑟丹酸、川芎内酯等成分。对川芎挥发油只是对其成分的分析较活跃[2-6],知其含多种内酯成分(即丁叉内酯、藁本内酯、丁基苯肽、川芎内酯),在对大鼠血流动力学的影响、解热作用及其对家兔下丘脑5-HT、DA含量的影响有过报道[7-9],而对脑缺血再灌注的影响研究报道很少。本实验对川芎挥发油、川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响进行了研究,以期为川芎在治疗心血管系统疾病中老药新用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料:如下。 1.1.1 药物:川芎购于金华市医药公司。川芎挥发油自提。挥发油的提取[10]:称取川芎小颗粒(过二号筛)100g加蒸馏水400ml,连接挥发油测定器,加热至沸,保持微沸5小时,得淡黄色挥发油若干,密封储存于冰箱。磷酸川芎嗪冻干粉:50mg/瓶,吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司生产,批号 1.1.2 实验动物:健康ICR小鼠,雌雄各半,体重:25~30g;浙江省实验动物中心提供。 1.1.3 试剂:水合氯醛:250克/瓶,分析纯:上海化学试剂公司,批号SOD、LDH、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒:南京建成生物工程研究所。 1.1.4 仪器:752紫外分光光度计,上海精密科学仪器有限公司生产。SIR-40实验小鼠独立换气笼盒:由上海绍丰实验动物设备有限公司生产。 1.2 实验方法:如下。 1.2.1 动物处理:取36只小鼠,随机分为6组:挥发油低剂量组(H1组)、挥发油高剂量组(H2组)、川芎嗪低剂量组(C1组)、川芎嗪高剂量组(C2组)、生理盐水对照组(CK组)、假手术组(AO组),雌雄各半。H1、H2组分别给予3μl、6μl挥发油与5ml#8226;kg-1体积的生理盐水灌服,C1、C2组分别给予0.5g#8226;kg-1、1g#8226;kg-1川芎嗪与5ml#8226;kg-1体积的生理盐水灌服,1次/天,连续7天;CK组、AO组灌服同体积的生理盐水。末次给药1小时后,各组动物除AO组外,均按文献方法[11]稍加改良复制脑缺血再灌注模型。用10%水合氯醛按0.04ml#8226;10g-1剂量腹腔注射麻醉动物,颈部正中切口,用玻棒小心分离迷走神经,用动脉夹夹闭双侧颈总动脉30分钟,放开动脉夹恢复脑供血,再灌注60分钟后快速断头开颅取脑,于-4℃生理盐水中洗净,用吸水纸吸干后投入液氮速冻,-75℃冰箱保存待测。 1.2.2 脑组织乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的测定:分离并称取左侧大脑0.14g,按重量体积比1:10(1g:10ml)用-4℃生理盐水配制成10%脑组织匀浆。再按1:9用-4℃生理盐水稀释成1%脑组织匀浆,3000r/min离心10分钟。SOD、LDH活性、蛋白含量用试剂盒测定(1%匀浆);MDA含量用TBA比色法测定(10%匀浆)。 1.3 统计学处理:结果用x±s表示,数据采用t检验。 2 结果 2.1 脑组织中LDH活性:CK组与AO组比较,小鼠脑组织中LDH活性下降,但无显著性差异。H1、H2组、C2组的LDH活性与CK组比较有所增高,但无显著性差异。C1组的LDH活性明显提高,与CK组比较,有极显著性差异,P 1