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止痛消结丸治疗大鼠乳腺增生病实验探究收稿日期:2009-11-02 基金项目:咸阳市科技厅资助课题(2009jm4001) 作者简介:蔡国良(1956-),男,陕西人,主任医师、教授 ,研究方向:中医治疗乳腺病的临床研究。 (1.陕西中医学院,陕西 咸阳 712000;2.咸阳中铁二十局中心医院,陕西 咸阳 712000;3.陕西中医学院附属医院外一科,陕西 咸阳 712000) 摘 要:目的:通过观察止痛消结丸对乳腺增生病大鼠血液流变性及乳腺组织病理的改变,探讨止痛消结丸治疗乳腺增生病的机理。方法:选用 SPF 级雌性 Wistar 大鼠 70 只,随机分为空白对照组、模型对照组、模型证实组、止痛消结丸大、中、小剂量组、阳性对照乳癖消片组,采用苯甲酸雌二醇和黄体酮建立乳腺增生动物模型,予以相应药物治疗,空白对照组、模型对照组不用药。观察乳腺增生病大鼠血液流变性改变及乳腺组织病理变化。结果:模型组大鼠血液呈高黏、凝、聚状态,各用药组血液流变性指标大部分接近或低于正常水平,其中以止痛消结丸大剂量组作用尤为显著(P 1 实验材料 1.1实验药物? 苯甲酸雌二醇注射液,由上海通用药业股份有限公司生产,批号:070402,规格:1mL∶1mg;黄体酮,上海通用药业股份有限公司生产,批号:0705130,规格:20mg/mL;10%水合氯醛,陕西中医学院附属医院制剂中心,批号:2006080,规格:100mL瓶;乳癖消片,沈阳中药制药有限公司,批准文号:国药准字Z生产批号:050507;止痛消结丸,陕西中医学院该课题组提供,人临床用量为1次6g,1日3次,相当于生药量0. 36g生药/kg。 1.2实验动物? SPF级 Wistar雌性大鼠 70只,9周龄,体重(200±20)g,第四军医大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(军)002-005。大鼠常规饲养1周,适应环境后开始实验,用脱毛剂脱去第2、3对乳房周围的体毛进行用药干预。 1.3实验仪器? 电子秤,WT11001R型电子天平,普通离心机,BX-60光学显微镜,切片机,LG-R80型血液流变仪,游标卡尺等(陕西中医学院实验中心提供)。 2实验方法 2.1分组造模及给药? 将大鼠随机分为 7组,空白对照组、模型对照组、模型证实组、止痛消结丸大、中、小剂量组、阳性对照乳癖消片1.15g/kg组。除空白对照组外,其余各组大鼠大腿肌肉内注射苯甲酸雌二醇0. 5mg/kg,每天1次,连续25天后改用黄体4mg/kg,每天1次,连续5天,复制大鼠乳腺增生模型[3],空白对照组注射等体积生理盐水。造模第21天开始药物治疗,大、中、小剂量止痛消结丸组分别灌胃给予止痛消结丸混悬液4.64,2.32和1.16g生药/kg,相当于成人用量的14,7,3.5倍。阳性对照乳癖消组灌胃乳癖消混悬液1.15 g生药/kg,相当于成人用量的10倍。空白对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水,连续给药30天。末次给药24h后进行实验。 2.2观察方法 2.2.1 血液流变性的测定 末次给药24h后,腹腔注射10%水合氯醛(0.4mL/100g)进行麻醉,心脏取血,肝素抗凝,以 LG-R80型血液流变仪测定全血黏度、血浆黏度、血沉、红细胞压积、纤维蛋白原,观察各组动物血液流变性指标。 2.2.2 乳腺组织病理的观察 在造模前、造模第20天及灌胃给药期间每10天测量大鼠第2对乳头的高度,末次给药24h后,取下第2对完整的乳房,用10%的福尔马林固定,石蜡包埋切片,HE染色,在光镜下做病理组织学观察。 2.3统计学处理? 数据分析采用SPSS 16.0统计软件,计量数据采用(均数±标准差)表示,组间比较采用单因素方差分析?t?检验:?P? 实验中,笔者采取目前公认的雌、孕激素联合造模法[3],用外源雌激素注射未孕大鼠(处女鼠),通过扰乱动物体内的性激素分泌,诱导动物的乳腺组织增生。造模后大鼠乳房明显红肿和增大,并有部分乳晕出现。给药后止痛消结丸大、中、小剂量组及乳癖消组大鼠乳头高度较模型组明显减小(表1)。在观察病理改变时,利用图象采集软件采集图像并测量,图像处理软件处理图像。放大100倍,直接计数乳房切片内全部乳腺小叶的数量;放大400倍,直接计数乳房切片内6个乳腺小叶的腺泡数量,计算平均值,作为该样本乳腺腺泡数量。放大400倍,测量6个乳腺腺泡的直径,计算平均值,作为该样本乳腺腺泡平均直径。与模型组比较,各治疗组增生程度不同程度的缓解,小叶数、腺泡数减少,腺泡腔直径缩小(P 1